华支睾吸虫成虫钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白的筛选及其生物学活性的研究

摘要

本文利用生物信息学方法,对华支睾吸虫cDNA文库的EST序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断后,筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(calcineurin B-like protein,CBLP)基因.主要工作有以下内容:1 CBLP的筛选与生物信息学分析 对华支睾吸虫成虫cDNA文库的EST序列中有3'端测序结果的基因序列进行拼接,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠CaN同一性53﹪,与尾刺耐格里原虫CaN B同一性40﹪,与新小杆线虫属结合蛋白的同一性51﹪,选择CsCBLP,进一步研究其生物学功能.2 克隆及鉴定 将CsCBLP基因克隆入高效表达载体pGEX-4T-1,经酶切及测序鉴定,重组pGEX-CsCBLP质粒正确.3 重组蛋白表达、纯化 工程菌BL21(DE3)/pGEX-CsCBLP经IPTG诱导3~4小时,对表达产物进行SDS-PAGE分析.4 蛋白酶切重组CsCBLP用thrombin蛋白酶对经GST亲合层析柱纯化的融合蛋白GST-CsCBLP酶切,PBS洗脱.用此纯化的蛋白进行生物学活性实验.5 rCsCBLP生物学活性分析本文通过生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白CBLP,将CsCBLP基因克隆、表达,并对其生物学活性及在华支睾吸虫成虫的组织分布进行了研究.结果证实,rCsCBLP具有钙调神经磷酸酶B亚基的钙结合活性,且CsCBLP基因主要分布于华支睾吸虫成虫的3生殖腺.结果提示,CsCBLP可能与华支睾吸虫成虫的生殖有关.由此可推测CaN具有作为防治华支睾吸虫药物靶标的潜能,因此本论文研究结果为筛选华支睾吸虫病综合防治的诊断抗原及药物靶标提供了坚实的实验基础.

目录

论文说明

关键词

前言

第一节华支睾吸虫研究概况

一、华支睾吸虫的流行病学及危害

二、华支睾吸虫病综合防治的现状

三、华支睾吸虫基因组研究现状

四、华支睾吸虫药物靶标的研究概况

第二节华支睾吸虫钙调神经磷酸酶的研究概况

一、调神经磷酸酶的物理特性及分子结构

二、CaN的生物学活性

三、CaN的分布

四、CaN在人病原体中的研究概况

五、CaN在华支睾吸虫中的研究进展

第三节生物信息学

一、生物信息学的主要研究内容

二、生物信息学的常用工具

三、生物信息学在寄生虫基因组研究中的应用

第一章材料与方法

一、材料

二、方法

第二章结果

一、应用生物信息学筛选CsCBLP基因并分析其结构

二、CsCBLP基因的克隆与鉴定

三、IPTG诱导融合蛋白表达

四、Western blot检测融合蛋白的表达

五、重组CsCBLP活性检测

六、重组CsCBLP构象分析一圆二色谱分析

七、rCsCBLP基因在华支睾吸虫成虫的组织分布

版图1

版图2

第三章讨论

一、用生物信息学筛选CsCBLP基因并分析其结构

二、CsCBLP原核表达载体的构建及鉴定

三、rCsCBLP生物学活性分析

四、rCsCBLP在华支睾吸虫成虫组织的分布

小结

参考文献

附件

致谢