体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验研究

摘要

在这里,我们以生长因子为工具,试将ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞,同时,在诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞时,我们采用了三种不同的细胞培养方式,即EB方式、形成EB一定时间后将EBs消化成单个细胞(EB-单层)方式和细胞单层方式,以比较这三种方式的ES细胞的诱导效果.此外,我们还探讨一个五个阶段的、包含七种生长因子的分阶段诱导方法能否诱导ES细胞分化为功能良好的胰岛素分泌细胞.期望通过上述研究,为今后ES细胞应用到糖尿病临床治疗,最终治愈糖尿病打下基础.第一部分GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinimide五种生长因子联合诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞一.目的联合应用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五种生长因子诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞.二.方法1.ES细胞的培养2.ES细胞的诱导3.HE染色4.DT染色5.免疫组化6.RT-PCR7.胰岛素阳性细胞的计数8.培养液胰岛素水平的检测9.数据处理和分析;四.小结以胚胎体方式进行诱导,联合应用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五种生长因子可将E14.1小鼠ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞;以葡萄糖作用细胞时,胰岛素分泌细胞可释放胰岛素到培养液中,并且提高葡萄糖浓度时胰岛素分泌水平有所提高,但培养液胰岛素水平很低,提示所诱导出来的胰岛素分泌细胞功能欠佳.第二部分三种不同细胞培养方式对ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞诱导效果的初步比较一.目的以EB-单层和细胞单层两种不同的细胞培养方式,联合应用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五种生长因子诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞,结合第一部分(即EB方式)结果,初步比较三种方式的ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的诱导效果.二.方法1.ES细胞的培养2.ES细胞的诱导3.HE染色4.DTZ染色5.免疫组化6.RT-PCR7.胰岛素阳性细胞的计数8.培养液胰岛素水平的检测.9.数据处理和分析第三部分多种生长因子分阶段诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞一.目的探讨一个五个阶段的、包含GLP-1、HGF、NGF、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide等七种生长因子的分阶段诱导方法能否将ES细胞诱导分化为功能良好的胰岛素分泌细胞.

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一部分GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五种生长因子联合诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞

第二部分 三种不同的细胞培养方式对ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞诱导效果的初步比较

第三部分 多种生长因子分阶段诱导 ES 细胞分化为胰岛素分泌细胞

总 结

参考文献

附 图1

附 图2

综 述 胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的定向分化

附录一主要溶液的配制

附录二 在读期间发表的论文

附录三缩写词表

致谢

原创性声明