花生种子EST分析及贮藏蛋白和抗性基因分子克隆

摘要

本研究利用EST和RACE技术，分离到5个编码花生球蛋白基因的全长cDNA序列(Ara1到Ara5)和6个花生conglutin基因的全长cDNA序列(AhCONG1到AhCONG6)。Ara1和花生过敏原Arah3(accessionno.AF093541)有99％的同源性，认为它们是同一基因。AhCONG1、AhCONG2和AhCONG5氨基酸序列分别与花生过敏原Arah2.02、Arah2.0和Arah6氨基酸序列完全一致，可见它们属于同一基因。Ara2、3、4、5是花生球蛋白基因新成员。AhCONG3、AhCONG4和AhCONG6是花生conglutin基因的新成员。Ara1、Ara2和Ara3具有与花生过敏原Arah3一致的4个过敏决定部位(epitope)，Ara4具有类似花生过敏原Arah3的3个过敏决定部位(Epitope1-3)。Ara5的类过敏决定部位中的关键氨基酸出现突变，Ara5是否具有过敏性需进一步研究。在AhCONG3、AhCONG4和AhCONG5的一级结构中没有发现能和IgE结合的抗原决定部位DPYSP。基于氨基酸序列建立的系统树表明花生球蛋白基因至少有三个亚基因家族，花生conglutin基因至少可分为三类。　　本研究还分离到2个油质蛋白基因的全长cDNA序列(AhOLE01和AhOLEO2)和8个抗性相关基因的全长cDNA序列，包括3个LEA蛋白、1个Cu-ZnSOD、1个抗坏血酸过氧化物酶、1个病原相关蛋白、1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂和1个胰蛋白酶抑制剂。　　此外，本研究还分离到花生球蛋白Ara3总长为2157bp的基因组DNA序列。该基因包括4个外显子和3个内含子。3个内含子的长度较短，分别为97bp、107bp和80bp。这些内含子的AT比例很高，分别为78.3％、73.8％和75.0％。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

1.前言

1.1 EST技术概述

1.2 EST技术的应用

1.3几种重要经济的EST研究进展

1.4生物信息学数据库

1.5豆类种子贮藏蛋白研究现状

1.6油质蛋白

1.7种子抗性相关蛋白研究现状

1.8豆科植物种子贮藏蛋白的基因表达调控

1.9豆科植物种子的基因工程

1.10花生致敏原的研究进展

1.11花生种子贮藏蛋白研究进展及本实验的意义

2.材料与方法

2.1材料

2.2琼脂糖凝胶电泳

2.3 cDNA文库的构建

2.4 EST序列的克隆及分析

2.5目的基因全长cDNA的克隆

2.6花生球蛋白基因组DNA序列的分离

3.结果与分析

3.1 EST序列的分离

3.2 EST序列的同源性分析

3.3 EST序列的功能分析

3.4贮藏蛋白全长cDNA克隆及其序列分析

3.5油质蛋白全长cDNA的克隆及序列分析

3.6花生种子抗性基因全长cDNA克隆及序列分析

3.7贮藏蛋白基因组DNA的克隆及序列分析

4.讨论

4.1 应用EST技术分析基因表达和克隆新基因

4.2花生种子贮藏蛋白的基因分析

4.3花生种子贮藏蛋白与过敏原的关系

4.4展望

5.结论

参考文献

附录：在读硕士期间发表的论文及论文摘要目录

致谢

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