生物型人工半月板的研制和重建山羊膝关节半月板缺失的实验研究

摘要

在本实验利用获得专利的组织处理技术，制备出新型生物型半月板，进行了以下研究：二实验方法与结果 第一部分：生物型半月板的体外降解方法：制备去抗原生物型半月板，选择胶原酶、木瓜蛋白酶、透明质酸酶和胰酶，对去抗原和新鲜半月板37℃酶解3、7、15、30d。另取2种半月板在PBS液37℃下水解30d。采用失重法、紫外光谱分析及扫描电镜测定材料的降解特性。 结果：2种半月板酶解的效果显著，以胰酶最为明显，但去抗原半月板降解程度明显低于新鲜半月板。其水解率分别0.76％、0.81％。扫描电镜观察下，去抗原半月板的空间结构改变程度较新鲜半月板明显低。去抗原半月板的亲水性较新鲜半月板稍低：吸水率分别为157％及188％；保水率分别为152％及167％。 第二部分：生物型半月板的体外生物相容性实验 方法：分离培养兔软骨细胞，与生物型半月板和新鲜猪半月板混和培养，分别在细胞接种第1、2、3周将2种半月板材料的细胞-材料复合物各取出3块，常规HE染色，光镜下观察细胞在材料表面生长情况。同样时间段，将2种细胞-材料复合物各取出3块，扫描电镜下观察软骨细胞在材料表面的生长情况。 结果：成品生物型半月板仍又轻度残留细胞毒性，经过PBS漂洗后残留毒性基本消失。软骨细胞和生物型半月板混和培养一周后，HE染色可见有细胞贴附于材料表面及侧壁。培养2周，细胞数量较前增多，材料表面可见细胞黏附成层状，细胞有少量基质分泌，沉积于细胞周围，材料内部未见软骨细胞长入。培养3周时，材料表面可见大量细胞黏附成层状，有的多达3-4层细胞，有较多基质分泌。扫描电镜观察，随着培养时间延长，细胞在材料表面生长良好，细胞密度增加。3周时，可见细胞粘附在材料表面，有伪足伸出，细胞间通过伪足相互连接，并可见细胞分泌的大量基质沉积于细胞周围和材料表面，部分区域形成类似于软骨陷窝样结构。新鲜半月板和生物型半月板相比，在细胞数量方面的差别无统计学意义(P＞0.05)。形态学观察表明，软骨细胞在生物型半月板表面可以正常黏附、增殖，并能较好地保持其形态、表型和基质分泌功能。 第三部分：生物型半月板移植修复羊膝关节半月板缺失 方法：切除山羊的膝关节内侧半月板，对生物型半月板塑形后植入羊的膝关节，分别于术后1月、3月、6月、1年处死动物，行组织学，扫描电镜及墨汁灌注观察微循环等检测。 结果：所有动物患肢切口均愈合良好，无感染，无死亡。植入半月板与周围组织愈合良好，连接紧密。随着术后时间的延长，植入半月板逐渐吸收溶解，植入半月板内出现活的细胞，但术后1年仍有约1/4的组织无活细胞。术后1年墨汁灌注发现，周围组织长入并建立微循环，但仅限于周边约10％的范围(正常山羊约15％)。植入半月板在术后6个月开始逐渐吸收溶解，扫描电镜下可见植入半月板表面逐渐毛糙就有部分区域有破裂现象，但术后1年仍保持大体的形态。

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一章：生物型半月板体外降解的实验研究

第二章 生物型半月板的体外生物相容性实验研究

第三章生物型半月板移植修复羊半月板缺失的实验研究

结论

参考文献

附 图

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