选择性环氧合酶-2抑制剂防治造血干细胞移植预处理诱发口腔黏膜炎的实验研究

摘要

本实验拟在已建立的CTOM大鼠模型上检测COX-2的表达水平，并观察选择性COX-2抑制剂对OM的防治作用。 研究目的：探讨选择性COX-2抑制剂对CTOM的防治作用。 研究方法： 1.COX-2在CTOM过程中的表达56只雄性SD大鼠随机抽取40只作为模型组，按本课题组前期所建立的造模方案复制CTOM动物模型。其余16只作正常对照组。每日记录体重和口腔黏膜炎指数(oralmucositisscore，OMs)。在用药完成后12hr(即实验开始的第3d)、36hr(即实验开始的第4d)、第6d、7d、9d、10d、12d、14d分别处死模型组大鼠6只，对照组大鼠2只。随机抽取部分大鼠胸骨骨髓和外周血作骨髓涂片和白细胞计数检查骨髓抑制情况。取颊、舌部黏膜组织，部分用于病理学检查和COX-2免疫组化染色，并按已报道的方法计算阳性细胞染色程度和百分率；部分用于COX蛋白活性检测。 2.选择性COX-2抑制剂塞来昔布对CTOM防治作用研究55只雄性SD大鼠随机分为：疾病预防组15只；疾病对照组15只；疾病治疗组15只；正常对照组10只。疾病预防组在造模前4d开始每日灌胃给予选择性COX-2抑制剂塞来昔布10mg/kg/d，至实验结束。疾病治疗组接受化疗用药后，于实验第4d开始，每日灌胃给予相同剂量塞来昔布，至实验结束。疾病对照组用于复制CTOM模型。正常对照组不予处理，常规饲养。每日记录动物体重、OMS，统计各组生存曲线、累积生存概率和中位生存天数；按不同时点处死动物取材，作组织病理学检查和免疫组化染色。 研究结果： 1.COX-2在CTOM过程中的表达模型组动物生存状况、生存率(80％)、体重、OMS、骨髓象、白血病计数等变化的总体情况与本课题组前期结果基本相同。在此基础上，本实验观察到5只大鼠的OM病损出现在未经搔刮的舌背和舌尖部，而且黏膜多个部位上皮松解，易撕裂出血，尤其是门齿周围和颊部。病理检查见溃疡区上皮黏膜完整性破坏，棘细胞层崩解，剩余上皮全层变薄，舌部丝状乳头不明显。溃疡底部肌层见灶性坏死，黏膜下层血管扩张，点状出血；炎症细胞在病损区散在分布。模型组标本在各时点均有不同程度的COX-2阳性染色，分数最小值为3.00±0.82(12hr)，最高分5.33±1.15(6d)；各时点间分数值无显著性差异(P＞0.05)。COX-2阳性细胞广泛分布于上皮和上皮下组织。在颊部溃疡组织中，上皮细胞染色不明显；在舌部自发溃疡标本中舌背和舌腹黏膜上皮棘层细胞呈带状强阳性染色。在上皮下血管内皮细胞、成纤维细胞和肌纤维均可见COX-2阳性染色；坏死灶和较大血管周围还可见COX-2阳性细胞环绕。正常黏膜上皮和上皮下组织中未见COX-2阳性表达。COX-2蛋白活性在各时点内均可检出。第4d、6d、10d的COX-2活性分别占总COX活性的36.87％、76.45％、和55.06％。COX-1在各时点内及正常黏膜组织中均可检测出不同程度的表达。 2.选择性COX-2抑制剂塞来昔布对CTOM防治作用研究疾病预防组和疾病治疗组生存率显著低于疾病对照组和正常对照组(P=0.000)。疾病预防组大鼠最长生存时间仅为8d，8d累积生存概率18.75％，中位生存时间为6.83d。疾病治疗组大鼠最长生存时间10d，8d累积生存概率为40.11％，中位生存时间为8.79d。疾病对照组和正常对照组间生存曲线无显著性差异(P=0.052)；疾病预防组和疾病治疗组、疾病对照组及正常对照组；疾病治疗组与疾病对照组及正常对照组间差异有统计学意义。疾病预防组大鼠的OM发生率93.33％(14/15)，且病损一开始便达到2～3级，随后病程发展迅速，到第7d累计有3只大鼠发生5级OM。疾病治疗组大鼠的OM发生率为80.00％(12/15)，第4dOM发生率为66.67％(10/15)。有2只大鼠的OM在第6d缓解，未发展成溃疡；其余的病损均未观察到明显愈合迹象，累计有4只大鼠的病损发展至4级(第8d)。各组的OM发生情况不相等，OM严重程度依次为：疾病预防组＞疾病治疗组＞疾病对照组＞正常对照组。从第5d开始，各组的体重差异显著(P＜0.05)。4组COX-2免疫组化染色分值差异显著(P=0.000)。染色程度顺序依次为疾病对照组＞疾病治疗组＞疾病预防组＞正常对照组。免疫组化染色显示疾病预防组和疾病治疗组局部黏膜上皮细胞可见少量不同程度的COX-2阳性表达，染色程度适中到弱染；黏膜下仅见少量肌纤维细胞和成纤维细胞弱染；血管内皮细胞和中性粒细胞均未见阳性染色。各组OMs与免疫组化得分间无显著相关性。 研究结论： 1.CTOM大鼠模型口腔黏膜组织中COX-2表达上调，但与OM发展过程无显著相关性。 2.口服塞来昔布(10mg/kg/d)能抑制CTOM大鼠模型口腔黏膜组织中COX-2的表达水平，但未显示出有效防治CTOM的作用。

目录

文摘

英文文摘

引 言

第1章 环氧合酶-2在CTOM发展过程中的表达

第2章 选择性环氧合酶-2抑制剂防治CTOM的初步研究

结论

参考文献

附 图

附 件1 中英文对照词表

附件2 综述 肿瘤治疗诱发口腔黏膜炎的防治进展

附件3 个人简历

致 谢

原创性声明