中药复方“网点设计”方法学研究——减味藿香正气水的实验研究

摘要

本文以《太平惠民和剂局方》中成药名方藿香正气水的精简方减味藿香正气水为研究对象，运用均匀设计方法和中国药典药量范围，重新组成了10个组方。并且以药典藿香正气水的制备方法进行减味制备。选择对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的影响、对大鼠胃肠运动推进、对硫酸铜所致的家鸽呕吐模型的影响和对大肠杆菌和沙门氏菌的抗菌作用作为药理指标，对上述10个组方进行药理实验，获取药理数据。结果显示，对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的影响显著。 把均匀设计组合的10个减味藿香正气水的药味药量变化和对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的抑制率相关联，进行了减味藿香正气水最佳药味配比的研究。得到方程Y=74.23-1.42X<'2><,1>+22.20X<,1>+1.1X<'2><,2>-16.32X<,2>-3.46X<,3>-0.06X<'2><,4>-3.16X<,4>-0.0015X<'2><,5>，(R<,2>=1.0000，P=0.0048)，方程分析得出减味藿香正气水药味最佳配比是：厚朴7.82克；陈皮3克；苍术3克；半夏3克；广藿香油30 μL。 采用二极管阵列检测器、梯度洗脱方法，对10个组方进行了RP-HPLC分析，得到各组方的色谱指纹图谱，共得到40个共有色谱峰。将药理数据和各指纹峰相对峰面积相关联，确定减味藿香正气水中2个色谱峰所代表的化学成分为该方的药效物质基础。其中一个是厚朴中的厚朴酚。 10个减味藿香正气水组方中厚朴酚、和厚朴酚和橙皮苷的测定结果表明组方中成分含量的高低没有随着方中药味药量的增大而增大，说明5种单味药组合之后，发生了复杂的化学变化，导致成分含量的改变，复方不等于单味药的简单相加。运用放免实验方法，考察了减味藿香正气水对大鼠血浆、肠和胃中胃泌素分泌的影响。结果减味藿香正气水-1对血浆、肠道和胃中胃泌素的分泌都有一定的抑制作用。减味藿香正气水-5对血浆中胃泌素的分泌有显著抑制作用，对肠道胃泌素的分泌有一定的抑制作用。减味藿香正气水-2、-8、-9和-10对血浆和胃中胃泌素的分泌有一定的抑制作用。减味藿香正气水-1和-3对胃排空有显著的抑制作用，减味藿香正气水-1和-4对肠推进有显著的抑制作用。而其它减味藿香正气水样品对胃排空和肠推进有一定的抑制作用。减味藿香正气水-1对胃排空和肠推进都有显著的抑制作用。 运用的HPLC连续测定了全方藿香正气水中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、麝香草酚、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素和厚朴酚8个成分的含量。并对北京同仁堂和江西汇仁生产的藿香正气水进行了比较。发现它们最大区别在于成分柚皮苷、陈皮苷、麝香草酚和和厚朴酚含量上的差异，这说明两家药厂在生产中所使用药材质量上有不同。而同一药厂批与批之间成分含量差别显著，说明缺乏有效的质量控制方法来保持批间质量的稳定。 本研究在中医药学理论和实践的指导下，将中药学、分析化学、药理学、化学统计学和计算机技术相结合，初步确定了减味藿香正气水主要药理作用为对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠具有显著的抑制作用，即解痉作用。确定了减味藿香正气水发挥主要药效的最佳药量配比。运用HPLC方法，建立了减味藿香正气水的指纹图谱，为以后投入生产奠定了质量控制的基础。探讨了减味藿香正气水对胃泌素分泌的影响。运用SPSS统计分析软件，结合指纹图谱的化学数据和药理结果，推断了减味藿香正气水药效物质基础。作为附加内容，测定了藿香正气水中8个成分的含量，为当前藿香正气水的生产提供了一个较全面的质量控制方法。为中药现代化做了有意义的探索。

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

1.1中药方剂的历史与现状

1.2复方中药现代化研究概况

1.2.1复方中药拆方研究

1.2.2复方中药药效物质基础与质量控制方法研究

1.3减味藿香正气水研究概况

1.3.1方源考证

1.3.2减味藿香正气水药味组成

1.3.3减味藿香正气水各组成药味化学成分和药理作用研究

1.4中药复方“网点设计”方法学

1.5本研究立题依据

第二章减味藿香正气水样品的制备

2.1目的

2.2均匀设计方案

2.3减味藿香正气水样品的制备

2.3.1提取方法的选择

2.3.2制备方法

2.3.3实验材料

2.3.4样品溶液的制备

第三章减味藿香正气水药理指标的选择

3.1目的

3.2药理实验方法的选择

3.3减味藿香正气水对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠影响

3.3.1实验材料

3.3.2实验方法

3.3.3半数有效抑制浓度(EC50)的测定

3.3.4半数有效抑制浓度(EC50)的确定

3.3.5 10个减味藿香正气水组方对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的影响

3.4减味藿香正气水对大鼠胃排空及小肠推进的影响

3.4.1实验材料动物

3.4.2实验方法

3.4.3实验结果

3.5减味藿香正气水抗菌实验的研究

3.5.1实验材料

3.5.2实验方法

3.5.3实验结果

3.6减味藿香正气水对硫酸铜所致的家鸽呕吐的影响

3.6.1实验材料

3.6.2实验方法

3.6.3半数有效止呕浓度(EC50)的测定

3.6.4实验结果

第四章减味藿香正气水药味最佳配比的研究

4.1目的

4.2组方设计

4.3药理指标的选择

4.4减味藿香正气水对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠影响

4.4.1实验材料

4.4.2实验方法

4.4.3 10个减味藿香正气水组方对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的影响

4.5不同药量配比的减味藿香正气水组方对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的抑制率测定结果

4.6优化方程

4.7方程分析

4.8实验结果

4.9验证实验

第五章减味藿香正气水高效液相指纹图谱的研究

5.1目的

5.2研究对象

5.3实验材料

5.4减味藿香正气水高效液相指纹图谱的建立

5.4.1对照品溶液制备

5.4.2供试品溶液制备

5.4.3检测波长的选择

5.4.4柱温的选择

5.4.5流动相的选择

5.4.6色谱柱的选择

5.4.7参照物的选择

5.4.8方法学考察

5.4.9氯仿提取物的色谱条件

5.4.10 10个减味藿香正气水氯仿提取物的色谱图

5.4.11残渣提取物的色谱条件

5.4.12 10个减味藿香正气水残渣提取物的色谱图

5.5组方中厚朴酚、和厚朴酚和橙皮苷的测定

5.5.1色谱条件

5.5.2标准曲线的制备

5.5.3组方中厚朴酚、和厚朴酚和橙皮苷的测定结果

5.6讨论

第六章减味藿香正气水药效物质基础的统计推断

6.1目的

6.2共有色谱峰的确定

6.3 组方中40个共有色谱峰的相对峰面积和对乙酰胆碱所刺激的离体兔十二指肠的平均抑制率的结合

6.4 40个共有峰的皮尔逊相关系数和回归方程

6.4.1 40个共有色谱峰的皮尔逊相关系数

6.4.2回归方程

6.5统计结果

第七章减味藿香正气水作用机理的研究

7.1目的

7.2实验材料

7.3实验方法

7.4实验结果

第八章藿香正气水质量控制方法的研究

8.1目的

8.2实验材料

8.3研究对象

8.4对照品溶液的制备

8.5供试品溶液的制备

8.6色谱条件

8.7线性关系的考察

8.8精密度的考察

8.9回收率的考察

8.10对照品的色谱图

8.11北京同仁堂样品的色谱图

8.12江西汇仁样品的色谱图

8.13测定结果

8.14讨论

第九章结果和讨论

参考文献

致谢

个人简历

博士后期间发表的学术论文和承担的课题