发育信号SHH诱导恒河猴骨髓间质干细胞分化为神经样细胞的信号机制研究

摘要

针对骨髓干细胞定向诱导分化中存在的关键问题——细胞发育和命运决定中的信号调控机制不明确，研究神经发育调控因子Shh诱导的恒河猴骨髓间质干细胞向神经细胞诱导分化过程中，SHH信号系统和MAPK激酶系统的信号通路，深入探讨其调控机制。研究结论如下: 1.建立了体外培养扩增恒河猴骨髓MSCs的简便、稳定、高效的方法，证实所分离的细胞为骨髓MSCs，具有较强的增殖潜能，均一性较好，纯度较高，说明MSCs是一种较为理想的种子细胞。 2.建立了一种新的Shh诱导方案，成功诱导MSC向神经样细胞分化，分化后细胞表达神经干细胞标志物Nestin，神经元标志物NSE,NF-M,Tau、突触素和胶质细胞标志物GFAP。证实RA诱导方案能够诱导MSC向神经样细胞分化，表达Nestin},NSE,NF-M,Tau、突触素和GFAP，两种方案没有发现显著效率差异。但Shh能够诱导细胞出现典型少而长的轴突形态。免疫组化与电镜证据均表明，本文建立的Shh诱导方案是一种有效的神经诱导方案。 3.Shh诱导方案通过持续激活特异性受体ptc途径参与MSC向神经样细胞分化。RA诱导方案通过短暂激活选择性受体RAR途径参与细胞分化，而后这一反应可能被反馈抑制，其深入机制有待进一步研究。Shh与RA两种诱导方案之间没有显著受体途径交叉。 4.MAPK信号转导通路参与Shh诱导MSC分化为神经样细胞的信号传递，p38信号转导通路被激活，ERK1/2信号通路被抑制;p38信号传递系统抑制剂SB203580可使MSC分化为神经样细胞的过程减慢，神经样细胞突起长度减短。 5.EGFP腺病毒载体标记MSCs的体内外实验经系统评价，具有高效、无毒、稳定的特点，能够用于下一步体内实验研究，表明MSC是一种较为理想的转基因载体细胞。

目录

论文说明：英文缩写词汇表

摘要

前 言

材料与方法

结 果

讨论

全文小结

问题与展望

参考文献

附录

致谢