甲基强的松龙、他克莫司对肝癌生长的影响及其相关机制的研究

摘要

原位肝脏移植(orthotopic。liver transplantation，OLT)在80年代后迅速发展，成为各种终末期肝病(end-stage liver disease，ESLD)患者的治疗选择。原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的恶性肿瘤，其发病率高，恶性程度高，预后差，手术切除是治疗HCC的常用手段，然而实际手术切除率不到30﹪，且术后肿瘤复发率高达70﹪以上。作为治疗．ESLD的一种有效治疗方法，OLT以其对肿瘤治疗的彻底性，同时治愈了患者合并的肝硬化，因而具备传统肝切除手术无法比拟的优势。 但是HCC作为OLT的指征仍存在争议，主要原因是HCC，尤其是中晚期患者移植术后具有很高的复发率，移植术后免疫抑制剂的应用，使体内残留的肿瘤迅速增长，导致肝内和肝外转移的发生。近年国外肝癌肝脏移植的研究重点集中在如何降低肿瘤复发率方面。 免疫抑制剂的进步使器官移植患者的长期生存率不断提高，但受体面临许多威胁生命安全的与免疫抑制剂相关的并发症，其中最常见的就是肿瘤。接受移植的受体发生肿瘤及肝癌OLT患者术后肿瘤复发转移的危险性，明显高于未使用免疫抑制剂的人群。移植术后原发肿瘤的复发和转移也是严重影响器官移植疗效的重要因素。 移植术后新生肿瘤的发生，原发肿瘤的复发和转移与很多因素有关，其中包括术后免疫抑制剂的使用。肝癌OLT术后肿瘤复发、转移与免疫抑制剂的累积用量密切相关，而非仅取决于肿瘤的特征和分期。甲基强的松龙(Methylprednisolone，MP)和他克莫司(Tacrolimus，FK506)是OLT术后最常用的免疫抑制剂，有关他们与肿瘤复发和转移的研究较少，目前缺乏有力的实验研究证实使用MP、FK506是否会促进原发肿瘤的复发与转移。近年来对于肿瘤转移机制的研究发现，HCC转移是一个多步骤的复杂过程，在此过程中有多个因素参与了转移的调控。首先，肿瘤细胞必须依靠多种蛋白酶，尤其是基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)降解细胞外基质(extracellarmatrix，ECM)和基底膜；然后，肿瘤细胞凭借粘附分子产生的外力和细胞自身的运动相关蛋白脱离原来的组织，侵入附近的血管和淋巴管，形成癌栓游走或转运，并借助粘附分子细胞附壁及游出血管；最后，肿瘤细胞在相应的组织或器官产生新生血管，形成转移性肿瘤，此期细胞因子起关键作用。基质金属蛋白酶．2(matrix metalloproteinase 2，MMP-2)、细胞间粘附分子(intercellularadhesion molecule，ICAM)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是公认的反映HCC浸润、复发和转移的分子标记物。 基于上述背景，本研究目的在于：1、探讨MP、FK506对人肝癌细胞体外生长的影响及对细胞MMP-2 mRNA、ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA的转录和蛋白表达的影响；2、研究MP、FK506对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及相关机制。 本研究探讨了MP、FK506对肝癌生长的影响及其相关的机制，通过细胞体外实验及动物体内实验，得出以下结论： 1、MP在500～5000ug/l浓度时，可以促进人肝癌HepG2细胞株MMP-2 mRNA和VEGF mRNA的转录和蛋白表达；MP在50～5000ug/l浓度时促进人肝癌HepG2细胞株ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达。MP大剂量能促进裸鼠荷瘤模型MMP-2mRNA、ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA的转录和蛋白表达，促进皮下移植瘤的生长和肿瘤的肝转移。 2、FK506在20～50ug/l浓度时，能够抑制人肝癌HepG2细胞株ICAM-1mRNA的转录和蛋白表达；FK506对人肝癌HepG2细胞株MMP-2 mRNA和VEGF mRNA的转录和蛋白表达无明显影响。FK506小剂量能抑制裸鼠荷瘤模型ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达，对MMP-2。mRNA和VEGF mRNA的转录和蛋白表达无明显影响，FK506不会促进皮下移植瘤的生长和转移。 本实验结论显示，大剂量MP能促进肝癌生长，并可以促进肿瘤的复发与转移，FK506对肝癌的生长、复发和转移无明显促进作用，甚至表现具有一定的抗肿瘤效应，为肝癌肝脏移植术后患者免疫抑制剂的的选择提供了一定的实验依据。

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一章MP、FK506对人肝癌细胞体外生长影响的研究

材料与方法

结 果

小 结

第二章MP、FK506对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

材料与方法

结 果

讨论

小 结

总 结

问题与展望

参考文献

附 图

附 图1

附 图2

附 图3

附 图4

附录一:主要英文缩写词

附录二：博士期间以第一作者发表的论文

综述一肝癌转移的分子标记物

综述二常用免疫抑制剂与肿瘤的关系研究进展

致 谢