生态免疫肠内营养对重症胰腺炎大鼠肠道和胰腺的影响及作用机制的研究

摘要

[目的] 构建重症胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠模型，进行早期肠内营养支持干预，给予普通肠内营养(early enteral nutrition,EN)或生态免疫肠内营养(ecoimmunorlutrition，EIN)，检测牛态免疫肠内营养制剂在大鼠SAP中对保护肠黏膜、维护肠屏障功能，降低内毒素血症、保护胰腺等方面的作用，以为临床上早期生态免疫肠内营养治疗重症胰腺炎提供动物实验依据，旨在对SAP患者的治疗提供一定的指导。 [方法] 1、大鼠SAP模型和肠内营养支持模型的建立； 20只SD大鼠(体重250±20g)，随机分为假手术组5只(PS组)，重症胰腺炎组15只(SAP组)，SAP组分为SAP6h、SAP24h、SAP48h三个时间点观察组，各组5只。SAP组采用胰腺被膜下均匀注射3.8％牛磺胆酸钠(1ml/kg)造模，比较对照组和造模组各时间点血清淀粉酶和胰腺病理的情况。 采用开腹行胃空肠置管手术，建立大鼠肠内营养支持模型。 2、生态免疫肠内营养对SAP大鼠肠道和胰腺的影响及作用机制： 64只SD大鼠(体重250±20g)，随机分为假手术组(PS组)，重症胰腺炎组(SAP组)，重症胰腺炎早期普通肠内营养组(EN组)，重症胰腺炎早期生态免疫肠内营养组(ElN组)，每组16只。PS组及SAP组造模术后18h自由饮食、饮水，EN组造模术后18h给予普通肠内营养支持，EIN组给予牛态免疫肠内营养支持。分别于造模术后第4天(8只)和第7天(8只)取材，检测血、胰腺、肝脏等组织肠道菌群易位、血浆内毒素、肠通透性、肠黏膜形态学及超微结构改变，胰腺病理学评分等。从多个角度研究EIN对SAP大鼠肠道及胰腺的影响及其机制。 3、Realtime-PCR在检测SAP大鼠组织细菌易位的应用24只SD大鼠(体重250±20g)，随机分为假手术对照组(PS组)，SAP 4d组，SAP 7d组，每组各8只，造模方法同上，术后18h自由饮食、饮水。时间点到后，收集血、肝脏、肠系膜淋巴结、胰腺标本，将组织研磨后，应用QiampDNA mini kit，提取各样本DNA。设计合成细菌16sRDNA基因通用引物，采用荧光染料SYBR GrENI Realtime-PCRPCR法，定量检测各样本细菌16sRDNA基因浓度，比较各组之间的差异，以研究Realtime-PCR法在检测组织细菌易位方面的应用价值。旨在为临床上早期发现、早期诊治SAP细菌易位提供一种更快捷、有效的检测手段。 4、统计分析 应用SPSS 13.0软件进行统计分析，计量资料做方差分析或两组间t检验、计数资料行X2卡方检验，检验水准α=0.05。 [结论] 1、 SAP大鼠模型和肠内营养支持模型的建立： 本研究证实采用胰被膜下均匀注射牛磺胆酸钠，可成功建立SAP动物模型，具有重复性好，死亡率稳定，与人类SAP病情相似等优点，可适用于SAP的较长期的机制和治疗性研究。 本研究采用的肠内营养管放置和固定方法，及营养液的接通和输入模式是成功的。营养液的输入顺畅、均匀、持续，极少脱出、渗漏，所采用的器材价廉易得，术后营养支持管理方便，可适用于肠内营养支持方面较长期及较大规模的研究。 2、生态免疫肠内营养对SAP大鼠肠道和胰腺的影响及作用机制； (1)SAP肠黏膜明显萎缩，绒毛、细胞问紧密联结受到破坏，肠黏膜通透性增加；EN可一定程度上维护肠黏膜结构，保护肠屏障；EIN可显著改善肠黏膜屏障，促进绒毛生长，维护细胞正常结构，降低肠黏膜通透性； (2)EN、EIN对SAP的胰腺有保护作用，可减轻胰腺病变程度；以EIN作用更显著。 (3)SAPIh_r普遍存在细菌易位，菌血症(败血症)相对少见，EN、EIN均可抑制SAP肠道细菌易位，以EIN作用更显著； (4)FN、EIN可显著减轻SAI导致的内毒素血症，以EIN疗效更佳。 3、Realtime-PCR在检测SAP大鼠组织细菌易位的应用(1)Realtime-PCR是检测组织细菌易位的可靠工具，具有快速、敏感、方便、准确、精确定量等优点； (2)SAP大鼠存在明显的细菌易位，以肠系膜淋巴结、胰腺两个脏器明显。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

声明

前言

第一部分大鼠重症胰腺炎模型及肠内营养支持模型的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第二部分生态免疫肠内营养对SAP大鼠肠道和胰腺的影响及作用机制的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

4 小结

参考文献

第三部分Realtime-PCR在检测脏器细菌易位上的应用

1材料与方法

2结果

3 讨论

4小结

参考文献

全文总结

致谢