日本血吸虫可溶性虫卵抗原在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的防治作用及其机制探讨

摘要

本实验拟应用日本血吸虫SEA来研究其对EAE的防治作用，并探讨其可能的保护机制，同时，初步分析SEA的神经保护作用：SEA诱导的NTs表达增加与Th2的免疫反应有关，NTs的产生增加又能扩大SEA诱导的Th2的免疫反应，因此形成一个Th2反应和NTs之间的正向调节环路。为EAE及MS的防治提供新的治疗方案，为SEA的临床应用提供新的理论依据。 第一章 日本血吸虫SEA对FAF的防治作用 目的:观察日本血吸虫SEA对EAE的预防和治疗作用。 方法: 按常规方法获得成熟虫卵，提取粗制的SEA经100，000×g 4℃超速离心2h并过滤除菌后，得到无菌的SEA超低温保存备用。制备EAE模型，分别进行预防和治疗两方面实验。在预防实验中，分SEA(100 μ g，i．p．，每周一次，连续四周，共四次)预处理组和PBS对照组；在治疗实验中，分别在EAE诱导时及EAE发病时进行干预，并设EAE对照组，定期称重并每天观察临床评分。取EAE诱导后的第40天为实验终点，对EAE脑和脊髓进行炎症、脱髓鞘和轴突损伤评价的神经病理学检查。 结论 :SEA对EAE具有预防作用，这种效应在疾病的起始阶段发挥作用，在疾病的效应阶段则无作用；SEA对EAE的保护作用是一种缓和的、较长期的效应；SEA从EAE的各个病理环节发挥效应。 第二章 SEA对EAE保护作用的机制探讨 目的 :探讨SEA对EAE保护作用中可能存在的机制。 方法 采用体外脾脏细胞原代培养的方法，取EAE诱导后第40天实验终点的脾脏细胞，经不同抗原刺激，用ELISA和real—time PCR法检测培养上清和细胞中IL-4和IFN-γ蛋白和基因的表达水平；并检测体循环血清中及CNS内IL-4和IFN-γ蛋白和基因的表达。检测外周和中枢内Foxp3基因的表达，并用Westernblot检测脑和脊髓中NGF和BDNF的表达。 结论: SEA对EAE的保护作用与外周和中枢病灶内的Th2反应上调和／或Th1反应下调有关，Foxp3+Treg细胞可能不参与SEA的保护机制，脊髓内NGF的表达增高可能是SEA神经保护的一种可能机制。 第三章 日本血吸虫SEA诱导的Th2免疫反应与NTs之间正向调节作用的初步研究 目的 :探讨SEA诱导的Th2免疫反应与NTs之间是否存在正向调节作用。 方法 :用100 μ g SEA和等体积的PBS预致敏后四周，采用体外实验的方法，用ELISA和real-time PCR法检测外周脾脏细胞经不同抗原刺激后EAE诱导前SEA诱导的Thl／Th2的免疫状态，并检测这种免疫状态下NGF和BDNF的表达情况。体外培养的脾脏细胞补加不同浓度的Th2型细胞因子IL-4及其中和抗体观察对NGF和BDNF表达的影响，反之，增加不同浓度的NGF用ELISA法观察对Th1／Th2免疫反应的影响。 结论: SEA预致敏能使体内外周免疫形成Th2偏移的免疫环境，同时增加NGF和BDNF的表达，具有神经保护的潜能，这种表达增高的NGF和BDNF与Th2的免疫偏移无关，但NGF能扩大SEA诱导的Th2反应上调和／或Th1反应下调。SEA诱导的免疫反应与NTs之间存在着相互交流。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词中英文对照

声明

前言

第一章日本血吸虫SEA对EAE的防治作用

材料与方法

第一节SEA的制备与保存

第二节EAE模型的制作及实验干预

结果

讨论

第二章SEA对EAE保护作用的机制探讨

材料与方法

结果

讨论

第三章日本血吸虫SEA诱导的Th2反应与NTs之间正向调节作用的初步研究

材料与方法

结果

讨论

结论与创新

参考文献

攻读博士学位期间发表论文的情况

综述：血吸虫虫卵抗原对自身免疫疾病保护机制的研究进展

致谢