酿酒酵母中Geminin同源蛋白的筛选与鉴定

摘要

Geminin是一个重要的细胞周期蛋白，它通过与另一个细胞周期蛋白Cdt1的相互作用对细胞周期进行调控。此外，在多细胞真核生物中，Geminin还参与了神经组织的形成以及胚胎细胞的分化过程。 到目前为止，Cdt1p的同源蛋白在从酵母到人类多种真核生物中被发现，但是Geminin的同源蛋白还没有在酵母中找到。本文通过信息生物学的方法搜索到3个可能的Geminin同源蛋白。通过研究发现，其中一个叫Far3p的蛋白可能是Geminin的同源蛋白。 两个不同类型的单倍体酵母细胞交配结合成一个二倍体的过程是一个复杂的过程，其中包括对细胞周期的调控，使待参与交配的酵母细胞的细胞复制活动中止并停留在G1期。Far3p目前所知功能即参与这一调控过程，而具体如何调控细胞周期的机制尚不清楚。我的研究发现，利用酵母双杂交的方法，Far3p可以与Cdt1p相互作用，并且Far3p可以自身相互结合，可能是以超螺旋的方式形成一个二聚体，同时Far3p可以与酿酒酵母的hox家族蛋白Matalpha2p相互作用。而这些特征都符合Geminin特性。一系列的研究显示Far3p有可能是Geminin在酵母中的同源蛋白。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词与英汉对照

声明

第一章前言

1.1 DNA复制起始

1.2酿酒酵母的DNA复制起始

1.3酿酒酵母有性生殖过程中的信号传导

1.4 PSI-BLAST

1.5 Geminin

1.6酵母双杂交筛选的原理

第二章材料和方法

2.1材料

2.2方法

第三章结果与分析

3.1用PSI-BLAST方法在NCBI数据库中的筛选结果

3.2 ACE2，FAR3和YER128W的AD，BD克隆的构建

3.3 ACE2,FAR3,YER128W与CDT1的酵母双杂交

3.4酵母双杂交验证Far3p是否能自身相互结合

3.5验证HOX家族蛋白Matalpha2p与Far3p的相互作用

3.6 Far3p的作用位点

第四章讨论

4.1 FAR3是Geminin同源基因的可能性

4.2 Far3p与Cdt1p、Matalpha2p作用及自身结合的作用位点

4.3 FAR3与细胞周期的关系

4.4展望

参考文献

附录

致谢