鼻咽癌C-KIT的表达与突变及其靶点药物Imatinib的体外药敏试验和局部晚期鼻咽癌化放疗的随机对照研究

摘要

目前为止，同时期化放疗和诱导化放疗是两种最有生存获益的治疗方式，然而，两者序贯应用是否能进一步提高生存率仍未可知。因此，在2002年，我们设计了分层随机对照的临床研究，比较诱导+同时期化放疗和诱导化放疗在92分期III、IV期的鼻咽癌病人中的疗效。本文报道了此研究3年随访结果。
　　 第一部分利用组织芯片技术分析C-KIT蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义
　　 目的：
　　 C-KIT蛋白与肿瘤的发生、进展密切相关，并且是Imatinib作用的靶点。本研究调查了C-KIT蛋白在鼻咽癌中的表达情况和其临床意义并且评价了Imatinib应用于鼻咽癌的可能性。
　　 方法：
　　 石蜡包埋的153例鼻咽癌和165例正常鼻咽上皮组织制成组织芯片染色。在153例鼻咽癌病人中，42例有临床资料，包括性别、年龄、分期和生存数据。
　　 结果：
　　 37.3％(57/153)的鼻咽癌标本C-KIT阳性表达，4.8％(8/165)的鼻咽上皮阳性表达(P=0.000)。C-KIT表达与性别、年龄、分期无关，但与差的无局部复发生存有关(P<0.05)，近似与晚的T分期有关(P=0.067)。
　　 结论：
　　 我们的研究显示C-KIT蛋白的过表达更常见于鼻咽癌组织而罕见于正常鼻咽上皮，C-KIT过表达与差的无局部复发生存有关。上述结果为调查Imatinib在鼻咽癌中的治疗价值提供了初步依据。
　　 第二部分 C-KIT基因在鼻咽癌患者中的突变
　　 目的：
　　 C-KIT基因的功能获得性突变是胃肠间质肿瘤应用Imatinib治疗有效的真正分子标记，鼻咽癌是否存在C-KIT基因突变尚不清楚。我们检测了鼻咽癌患者C-KIT基因的突变情况，期望对Imatinib治疗鼻咽癌提供初步依据。
　　 方法：
　　 采用直接测序法对34例鼻咽癌组织中C-KIT基因9至21号外显子序列进行测序。
　　 结果：
　　 在34例鼻咽癌患者的442个外显子中，发现10个外显子存在突变，其中3个是点突变，1个是缺失突变。9、10、18、21号外显子的总突变频率分别是2.9％(1/34)，5.9％(2/34)，17.6％(6/34)，2.9％(1/34)。
　　 结论：
　　 鼻咽癌组织中C-KIT基因9、10、18、21号外显子存在突变，为进一步研究伊马替尼在鼻咽癌中的治疗价值提供了初步依据。
　　 第三部分鼻咽癌细胞株中C-KIT表达和突变以及对Imatinib的反应性
　　 目的：
　　 评价鼻咽癌细胞株中C-KIT表达和突变和对Imatinib的反应性，以及三者之间是否有相关性。
　　 方法：
　　 应用Western blot检测鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1、5-8F及鼻咽上皮细胞株NP-69的C-KIT表达情况，应用直接测序法检测CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1、5-8F C-KIT基因突变情况，应用CCK-8试剂盒进行Imatinib对CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F的增殖抑制实验，应用Pearson相关分析和f检验分析鼻咽癌细胞株中C-KIT表达、突变和对Imatinib的反应性三者之间是否有相关性。
　　 结果：
　　 1.鼻咽癌和鼻咽上皮细胞株中C-KIT的表达情况
　　 鼻咽癌CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F细胞株相对于鼻咽上皮细胞株NP-69存在C-KIT蛋白高表达。
　　 2.鼻咽癌细胞株中C-KIT基因的突变情况
　　 CNE-1、CNE-2、Hone-1发现杂合IVS17+78T>C，C-666纯合IVS17+78T>C，SUNE-1及5-8F无突变。
　　 3.Imatinib对鼻咽癌细胞株的增殖抑制作用
　　 Imatinib对CNE-1、CNE-2、Hone-1、C-666、SUNE-1及5-8F细胞株有剂量依赖的增殖抑制作用。
　　 4.鼻咽癌细胞株中C-KIT表达、突变和对Imatinib的反应性三者之间的关系应用Pearson相关分析和t检验分析三者之间无统计学意义的相关性。
　　 结论：
　　 鼻咽癌细胞株中存在C-KIT过表达和C-KIT内含子基因突变，Imatinib对鼻咽癌细胞株有剂量依赖的增生抑制作用，但是C-KIT蛋白、C-KIT突变和Imatinib的抑制作用之间未发现明显的相关性。
　　 第四部分鼻咽癌诱导化放疗与诱导加同时期化放疗的前瞻性随机对照研究
　　 目的：
　　 诱导化放疗与同时期化放疗被认为是局部晚期鼻咽癌最有效的两种治疗策略。本项随机研究目的在于比较诱导化疗加同时期化疗与单纯诱导化放疗在局部区域晚期鼻咽癌的疗效。
　　 方法：
　　 从2002年8月到2005年4月，408例病人随机分为2组：诱导化放疗(inductionchemoradiotherapy，IC/RT)组和诱导加同时期化放疗组(induction-concurrentchemoradiotherapy，IC/CCRT)。两组病人接受同样的诱导化疗方案：2程氟尿嘧啶脱氧核苷(Floxuridine，FuDR)+卡铂(Carboplatin，CBP)，(FuDR750 mg/m2，dl-5；卡铂AUC=6)，化疗结束后l周行放疗。诱导加同时期化放疗组的病人在在放疗的第7、28、49天接受卡铂AUC=6的化疗。8例病人不符合入组标准，剩余的400例病人进行了分析。
　　 结果：
　　 诱导加同时期化放疗组相对于诱导化放疗组III、IV度毒性分别为28.4％v13.1％(p<0.001)。中位随访3.9年，诱导加同时期化放疗组和诱导化放疗组的3年总生存分别为75.9％和83.4％(p=0.12)。两组之间在无病生存、局部区域控制和远处转移控制的差异无统计学意义。
　　 结论：
　　 本研究采用的诱导加同时期化放疗方案未能较诱导化放疗进一步提高局部区域晚期鼻咽癌的总生存率。
　　 第五部分依从性对局部晚期鼻咽癌诱导加同期化放疗与诱导化放疗比较结果的影响及患者预后的多因素分析
　　 目的：
　　 在第四部分，我们应用ITT分析比较诱导化疗加同时期化放疗与单纯诱导化放疗在局部区域晚期鼻咽癌的疗效。为了进一步评价化疗的依从性对该研究结果的影响和病人预后的影响因素，我们进行了本项研究。
　　 方法：
　　 患者分组及治疗方法在Part IV已介绍。诱导加同时期化放组选取完成全部2程诱导化疗和至少2程同时期化疗的病人(n=127)，诱导化放组选取完成全部2程诱导化疗的病人(n=187)进行PP分析(per protocol analysis)。应用Cox回归模型分别评价影响全部符合入组标注的患者、IC/CCRT或IC/RT组患者的预后因素。
　　 结果：
　　 应用PP分析，诱导加同时期化放疗组相对于诱导化放疗组III、IV度毒性分别为23.6％和13.4％(P=0.019)。中位随访3.9年，诱导加同时期化放疗组和诱导化放疗组的3年总生存分别为78.1％和84.6％(P=0.435)。两组在无病生存、局部区域控制和远处转移控制率的差异无统计学意义。Cox回归分析显示N分期和总分期是影响局部晚期鼻咽癌患者的最重要预后因素。
　　 结论：
　　 应用PP分析，本研究采用的诱导加同时期化放疗方案未能较诱导化放疗进一步提高局部区域晚期鼻咽癌的总生存率。影响接受化放综合治疗的局部晚期鼻咽癌患者的最重要预后因素是N分期和总分期。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章 利用组织芯片技术分析C-KIT蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

引言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第二章 C-KIT基因在鼻咽癌患者中的突变情况

引言

1.材料和方法

2结果

3讨论

第三章 鼻咽癌细胞株中C-KIT表达和突变以及对Imatinib的反应性

引言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第四章 鼻咽癌诱导化放疗与诱导加同时期化放疗的前瞻性随机对照研究

引 言

1.患者和方法

2.结果

3.讨论

第五章 依从性对局部晚期鼻咽癌诱导加同期化放疗与诱导化放疗比较结果的影响及患者预后的多因素分析

引 言

1.患者和方法

2.结果

3.讨论

结论及不足之处

参考文献

在读期间发表的论文

致 谢