人胚食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的染色体异常研究

摘要

背景与目的:现已证实几乎所有的人体恶性肿瘤都与染色体异常有关。因此,检测食管癌的染色体异常有助于阐明食管癌的癌变机制。HPV18E6E7基因转染人胚食管上皮细胞建立的永生化细胞株H5E973具有恶性变趋向,其61代细胞部分已恶性转化。H5E973细胞株和在H5E973培养传代后加入TPA诱导其恶性转化而建立的瘤细胞株LTPA为体外研究食管癌癌变机制提供了理想模型。本课题以这2个细胞株为实验对象,研究食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的染色体变化规律,为进一步研究食管癌的分子细胞遗传学异常提供有价值信息。
　　方法:体外传代培养H5E973和LTPA细胞,制备其中期染色体,用胰酶-Giemsa法进行G显带。分析H5E97326、43、89代和LTPA63代的染色体众数变化;对H5E97326、89代和LTPA63代进行G显带核型分析。此外,利用免疫组化和图象分析技术检测H5E97320、85代及LTPA74代细胞的HPV18E6、E7蛋白的表达情况。
　　结果:H5E97326代、43代、89代众数分别为56~62、58~63、61~64,LTPA63代众数为59~64。H5E973和LTPA细胞主要以超二倍体,尤其是亚三倍体为主。伴随传代次数增加,H5E973细胞众数右移,且亚三倍体也呈增多趋势。12、14、17和20号染色体数目增加和Y染色体的丢失在H5E97326、89代和LTPA63代均频繁出现。
　　在H5E973和LTPA主要发现了18个涉及1、2、4、5、6、7、8、9、10、13、14、19和21号染色体的基本可辨认的结构异常。但在LTPA63代所分析的6个核型中却未见到。
　　H5E97320、85代和LTPA74代均有HPV18E6、E7蛋白表达,但表达强度有所差异,其中E6、E7蛋白表达在H5E97385代的最强,在H5E97326代相对较弱。上述三代E7蛋白表达均强于E6蛋白。
　　结论:1.5E973、LTPA细胞主要以超二倍体、尤其是亚三倍体为主。H5E973细胞伴随代数增加出现染色体众数右移和亚三倍体增多。
　　2.12、14、17和20号染色体数目增加和Y染色体的丢失在H5E97326、89代和LTPA63代均频繁出现,提示其可能与食管上皮细胞永生化和恶性转化相关。
　　3.频繁出现是H5E97326、89代及LTPA63代的共同特征,可能在食管上皮细胞永生化和恶性转化中起重要作用。
　　4.der(9),t(9;9)( p24;q11)、der(9),t(9;9)(9qter→ cen→9qter)、der(13),t(13;13)(13qter→cen→13qter)、del(6)(q21)、i(7p)和der(4),t(4;2)(q21;q12)由永生化阶段至恶性转化阶段呈现进行性积累,推测上述异常染色体与食管上皮细胞的恶性转化有关。
　　5.H5E97320代、85代、LTPA74代均有E6、E7蛋白表达,但表达强度有所差异。E6、E7蛋白的表达在H5E97385代最强。上述三代E7蛋白表达均强于E6蛋白。

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封面

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中文摘要

英文摘要

前言

实验一

材料和方法

一、材料

二、方法

结果

1．染色体数目异常

2．染色体结构异常

实验二

材料和方法

1．主要试剂与仪器

2．方法

结果

讨论

一、染色体数目异常

二、染色体结构异常

三、HPV18E6、E7蛋白的表达

结论

展望

参考文献

致谢

食管癌染色体异常的研究进展