高脂血症对孕期大鼠急性胰腺炎的影响

摘要

背景:
　　急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)做为一种潜在的致命性疾病,其发病率逐年上升,妊娠合并AP并不多见,但它具有发病急、死亡率高的特点,从而对母婴造成极大的危害。妊娠合并AP的病因目前尚不清楚,一般认为,当I, IV,或 V型(Fredrickson's分类)高脂血症的患者在血清TG达到了1000~2000 mg/dL或以上可直接诱发AP。虽然目前临床上常有对孕期AP的报道,但国内外对高脂血症与孕期AP的研究极少,认识也极其有限。因此,通过研究高脂血症对孕期AP的影响,对于临床降低孕期AP所造成的危害具有重要意义。
　　目的:
　　研究高脂血症对孕期大鼠急性胰腺炎发生的影响,并探讨其可能机理。
　　方法:
　　48只雌性大鼠和24只雄性大鼠按雌雄比2:1合笼进行交配,饲养于标准动物房(22℃),给予规律光照(12 h:12 h),自由饮食。发现有阴道栓后记为妊娠第1 d,48只雌性大鼠全部怀孕按抽签法分为高脂饲料组(高脂饲料由83％均衡饲料、15%猪油和2%胆固醇配制而成)和均衡饲料组,每组24只。2组大鼠分别喂养16 d后,先于腹腔内注射L-Arg溶液(250 mg/100 g)(在注射L-Arg溶液前禁食12 h,自由饮水),1 h后,再次腹腔注射(200 mg/100 g)。2组大鼠分别于末次L-Arg溶液注射后0、12、24和48 h各取6只处死(本实验中所有的大鼠均怀孕),取门静脉血,分离血清,-70℃冰箱保存,用于测定血清甘油三酯、淀粉酶与脂肪酶;同时切取大鼠胰腺组织,一分为二,一部分备用于胰腺湿/干比测定,另一部分用多聚甲醛固定,石蜡包埋,备用。HE染色观察胰腺组织在以上各时间点病理学改变,并评分;采用免疫组化SP法观察胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达、Bax表达及Bcl-2的表达情况。全部数据以均数±标准差( x±s)表示,计量资料均数间的结果采用SPSS11.5统计软件进行方差分析,检验水准α=0.05。
　　结果:
　　(1)高脂饮食组甘油三酯值为均衡饮食组的3倍左右,明显升高(P<0.05);
　　(2)2组的淀粉酶峰值均出现在24 h,但高脂饮食组淀粉酶为5802.60±354.02,明显高于均衡饮食组(P<0.05);
　　(3)高脂饮食组脂肪酶的峰值12 h出现,为926.20±43.96;而均衡饮食组延至24 h时出现,为818.20±77.96,明显较高脂饮食组水平低(P<0.05);
　　(4)在L-精氨酸盐酸盐溶液末次注射后12和24 h,高脂饮食组的胰腺湿/干重比值分别为4.65±0.25、5.99±0.22,较均衡饮食组升高(P<0.05);
　　(5)高脂饮食组0 h镜下见局限胰腺小叶间充血,伴有个别炎症细胞浸润,但小叶结构完整,无水肿、出血;12 h见小叶间明显充血,局限水肿,炎症细胞浸润增多;24 h见腺泡张力高,腺泡细胞内大量空泡形成,分隔小叶,伴有点状坏死和出血,大量炎症细胞浸润;48 h小叶间及小叶内广泛重度水肿,小叶结构弥漫性破坏、丧失,出血严重,炎症细胞弥漫性浸润。均衡饮食组0、12和24 h与高脂饮食组比较,胰腺病理损伤明显减轻(P<0.05),48 h有所减轻,但差异无统计学意义(P>0.05);
　　(6)2组胰腺组织中TNF-α的表达随时间延长而增高,但在12、24 h高脂饮食组TNF-α的表达(分别为42.20±7.23、51.80±4.08)比均衡饮食组(分别为23.80±6.06、42.60±6.46)明显升高(P<0.05),表现为灰度值的降低;而0和48 h其表达也有升高,差异无统计学意义(P>0.05);
　　(7)2组胰腺组织中Bax的表达高脂饮食组在12 h的平均光密度值(0.381±0.024)最高且比均衡饮食组表达(0.294±0.031)明显升高(P<0.05),而对照组在24 h(0.342±0.027)最高,之后两组都随着时间点的向前推移呈下降趋势,但无显著性差异(P>0.05,)。
　　(8)2组胰腺组织中Bcl-2的表达高脂饮食组在12 h的平均光密度值(0.384±0.030)最高且比均衡饮食组表达(0.294±0.029)明显升高(P<0.05),而对照组在24 h(0.345±0.024)最高,之后两组都随着时间点的向前推移呈下降趋势,但无显著性差异(P>0.05)。
　　结论:
　　高脂血症能使L-精氨酸诱导的孕期急性胰腺炎提前出现,病理结果显示更严重,可能是胰腺炎发生、发展的一个危险因素,其机理可能是高脂血症时甘油三酯大量释放游离脂肪酸,上调TNF-α的表达,在此过程中凋亡基因Bax和Bcl-2可能参加诱导胰腺细胞的凋亡,从而减轻胰腺炎的严重程度。

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前言

论文正文高脂血症对孕期大鼠急性胰腺炎的影响一 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验仪器

1.3 主要试剂

二 实验方法

2.1 动物分组及药品制备

2.2 模型的制备及实验步骤

2.3 标本采集与保存

2.4 观察指标及方法

2.5 数据统计及处理

三 实验结果

3.1血清甘油三酯测定结果

3.2 血清淀粉酶活性测定结果

3.3 血清脂肪酶活性测定结果

3.4 胰腺湿/干比率检测结果

3.5 胰腺组织TNF-α的检验结果

3.6 胰腺组织Bax的检验结果

3.7 胰腺组织Bcl-2的检验结果

3.8 胰腺组织病理学改变及评分结果

四 讨 论

五 结论与展望

参考文献

附 图

综 述

致谢

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