姬松茸粗多糖对HL-60细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响

摘要

背景及目的：
　　急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)是一种以骨髓中大量的异常早幼粒细胞积聚,并伴有严重出血倾向为特征的白血病类型,在FAB分型中属M3型急性髓系白血病,常伴有t(15;17)(q22;q12)染色体易位所致的PML-RARα融合基因出现。在目前的治疗中,以全反式维甲酸和砷剂化疗为主,疗效较好,但同时也有比较严重的毒副作用,如维甲酸综合征及砷剂的毒性作用。因此寻找高效低毒、副作用少的药物对APL治疗很有必要。
　　姬松茸学名agaricusblazeimurrill(ABM),又称巴西蘑菇,是一种药食皆用的大型真菌。可以提高机体免疫力,常作为一种保健食品。目前研究显示姬松茸提取物姬松茸粗多糖对人肝癌、结肠癌、前列腺癌等实体瘤具有抑制增殖及诱导凋亡作用。NF-κB是一组作用广泛的真核细胞转录因子,参与细胞内信号传递,调控多种基因的表达。NF-κB在多种实体瘤细胞中都有异常活化表达,有研究表明抑制NF-κB的异常激活,可以促进实体瘤细胞凋亡。急性髓系白血病造血干细胞中93％的细胞NF-κB异常活化表达。本次研究通过体外培养急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞,研究姬松茸粗多糖对HL-60细胞增殖、凋亡的影响,以及对NF-κB活性的影响。为姬松茸粗多糖应用于急性早幼粒细胞白血病治疗提供了实验依据以及新的治疗思路。
　　材料和方法：
　　1.急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞在含10%胎牛血清,100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的RPMI-1640培养基中悬浮培养。
　　2.在培养HL-60细胞过程中加入ABM粗多糖,使得ABM粗多糖终浓度为1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL。分别培养HL-60细胞12h、24h、48h,以不含ABM粗多糖的培养基培养HL-60细胞做为对照组;用WST-1法检测ABM粗多糖对HL-60细胞增殖的影响;用流式细胞分析仪检测ABM粗多糖对HL-60细胞凋亡的影响;用免疫荧光法检测ABM粗多糖对HL-60细胞NF-κB活性的影响。
　　结果：
　　1.ABM粗多糖对HL-60细胞增殖的影响:用含不同浓度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)的培养基分别培养HL-60细胞12h、24h、48h。①培养12h后,10mg/mL组对HL-60细胞增殖有抑制作用(P<0.05);②培养24h后,2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL组对HL-60细胞增殖有抑制作用,且随着浓度增加抑制作用也有增强的趋势(P<0.05);③培养48h后,1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL各组对HL-60细胞增殖有抑制作用,随着浓度增加抑制作用也有增强的趋势(P<0.05)。提示:在一定浓度范围内,ABM粗多糖以剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖(P<0.05)。
　　2.ABM粗多糖对HL-60细胞凋亡的影响:用含不同浓度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)的培养基分别培养HL-60细胞12h、24h、48h后,HL-60细胞早期凋亡率均较各自对照组增加(P<0.05)。①培养12h后,10mg/mL组较其他浓度组早期凋亡率增加(P<0.05)。而1-5mg/mL组间早期凋亡率无差异;②培养24h后,1-10mg/mL组均使HL-60细胞早期凋亡率增加,且随着浓度增加,早期凋亡率也增加(P<0.05);③培养48h后,1-5mg/mL组使HL-60细胞早期凋亡率增加,且随着浓度增加,早期凋亡率也增加(P<0.05),而10mg/mL组早期凋亡率较低,可能与凋亡早期细胞进入凋亡晚期有关。
　　3.ABM粗多糖对HL-60细胞核转录因子NF-κB活性的影响:用含不同浓度ABM粗多糖(1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL)的培养基分别培养HL-60细胞48h后,用免疫荧光法染色。然后在荧光显微镜下观察NF-κB核转运情况并拍片。用IPP6.0软件分析得到ABM粗多糖浓度在1-10mg/mL时,所对应IOD分别为:5481.82±5340.31,4570.21±2828.79,2320.33±3896.60,1404.11±1615.22,对照组为6952.58±19628.98。细胞核内NF-κBP65IOD随着浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),提示ABM粗多糖可以阻止HL-60细胞NF-κB异常活化。
　　结论：
　　1.ABM粗多糖可以抑制HL-60细胞增殖,呈剂量依赖方式。
　　2.ABM粗多糖可以诱导HL-60细胞凋亡,呈剂量依赖方式。
　　3.ABM粗多糖可以阻止HL-60细胞NF-κB异常活化。

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目录

第一章 前言

第二章 材料和方法

2.1 实验仪器和设备

2.2 主要试剂

2.3 细胞株

2.4 实验相关试剂及配制

2.5 实验器械的处理

2.6 实验方法

第三章 结果

3.1 姬松茸粗多糖对HL-60细胞增殖的影响

3.2 姬松茸粗多糖对HL-60细胞凋亡的影响

3.3 姬松茸粗多糖对HL-60细胞NF-κB 活性的影响

第四章 讨 论

4.1 姬松茸粗多糖抑制HL-60细胞增殖

4.2 姬松茸粗多糖诱导HL-60细胞凋亡

4.3 姬松茸粗多糖作用HL-60细胞后NF-κB活性的影响

4.4 ABM粗多糖提取

第5章 结论

第六章 展望

参考文献

参考文献

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