上皮-间充质转化相关标记物在干燥综合征唇腺中的表达及意义

摘要

背景和目的：
　　干燥综合征(Sjogren’s syndrome,SS)是一种累及全身外分泌腺的自身免疫性疾病,临床上以口干、眼干为特征,90％为女性,男女比例为1:9～1:20,发病年龄高峰为40～50岁,此病可以单独存在,称为原发性干燥综合征(pSS),也可以与其他自身免疫疾病并存,称为继发性干燥综合征(sSS)。其临床表现复杂,发病机制仍不十分清楚。其主要病理特征表现为大量淋巴细胞浸润,此外还存在腺体萎缩,间质纤维化,腺体功能丧失,出现干燥症状。国内外报道发现组织器官慢性纤维化中,上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)过程发挥着至关重要的作用。
　　EMT是指在胚胎发育、肿瘤转移或组织纤维化过程中发生的上皮细胞脱黏附而转变成具有迁移能力的间质细胞的现象,即上皮细胞丢失掉上皮特征同时获得间质特征的过程。此过程出现上皮细胞发生活化,E-cadherin、β-catenin细胞角蛋白(CK)等表达下调,上皮细胞间的粘附性下降,极性丧失,活化的上皮细胞转变为间质细胞,表达Fsp1、Vinmentin、α-SMA等。E-cadherin是细胞之间相互黏附的钙依赖型跨膜蛋白,参与形成和维护正常细胞间的连接,Fsp1成纤维细胞特异性蛋白,作为上皮间充质转化过程中成纤维细胞标记的特异性蛋白,TGF-β1(转化生长因子)在EMT转化过程中起着重要的介导作用,Vinmentin是间质细胞成分标记。
　　慢性炎症中实质细胞的萎缩,上皮间质转化,胶原纤维增生是目前许多慢性纤维化疾病研究的热点。SS唇腺组织中间质纤维化,腺体萎缩是否存在上皮间质转化的病理机制还未所知,其Fsp1蛋白在唇腺中的表达情况如何未见报道。本实验通过Fsp1、E-cadherin、TGF-β1和Vinmentin的检测,了解唇腺病变中是否存在上皮间质转化机制,以及结合Masson染色和阿利新兰(AB)粘液染色分别观察SS唇腺纤维化程度和腺体细胞的分泌功能状况,试图探讨SS患者唇腺间质纤维化、上皮间质转化破坏粘液分泌功能的可能机制,并为临床病理诊断提供可靠的形态功能学依据。
　　材料和方法：
　　材料：
　　唇腺标本取自2008年1月--2013年3月期间汕大医学院病理科临床活检标本50例,符合2002年修订的干燥综合征国际分类诊断标准,并收集所有患者临床资料包括自身抗体(抗SSA、抗SSB抗体、ANA、RF)、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、球蛋白、γ-球蛋白),急性期反应物(C反应蛋白(CRP),红细胞沉降率(ESR))和补体(C3,C4)水平。10位非自身免疫性疾病患者的唇腺作为对照组。
　　方法：
　　1.HE染色切片观察唇腺的病变特点,确定SS唇腺病理分级。
　　2.胶原纤维染色用Masson染色观察唇腺中胶原纤维的面积百分比。
　　3.阿利新兰粘液染色用阿利新兰染色剂染色唇腺腺泡中粘液,观察唇腺粘液的面积百分比。
　　4.免疫组织化学染色用Envision两步法观察SS唇腺组织中E-cadherin、TGF-β1、Fsp1、Vinmentin蛋白的表达情况。
　　5.图像分析法应用Leica IM50图像采集系统和Image-Pro Plus 6.0图像分析系统对染色结果分析。
　　6.统计分析应用SPSS13.0对统计结果进行分析,采用t检验、方差分析和Pearson相关分析。
　　结果：
　　1.HE、阿利新兰染色和Masson染色观察在50例SS病变中,轻度病变7例,中度23例,重度20例。10例正常唇腺组织间质胶原纤维和粘液物质面积百分比分别为(5.0±1.6)%和(67.3±4.9)%,相比正常组织SS唇腺胶原纤维面积增加了约一倍(12.6±6.4)%,腺体粘液物质减少为正常的一半左右(30.3±6.8)%,正常与SS病变唇腺比较差异均有统计学意义(p<0.01)。随着病变程度加重,间质胶原面积的百分比逐渐增高,而分泌的粘液逐渐减少。
　　2.上皮细胞标记蛋白E-cadherin在10例正常唇腺组织的MOD值为0.136±0.056,SS病变唇腺E-cadherin的表达水平下降,MOD值为0.069±0.05,两者比较差别有统计学意义(p<0.05)。随着病变程度的增加,SS腺泡和导管上皮E-cadhrin表达逐渐减少,轻度、中度和重度病变唇腺E-cadhrin的MOD值分别为0.128±0.013、0.098±0.041、0.037±0.015。
　　3.上皮-间充质转化的重要调节因子TGF-β1在SS唇腺组织中相比正常表达增加。10例正常唇腺组织,TGF-β1的MOD值为0.032±0.013,50例SS唇腺组织TGF-β1的MOD值为0.067±0.04,两者比较差异有统计学意义(p<0.05);重度病变唇腺组织TGF-β1表达较轻度增加明显。
　　4.上皮-间充质转化特异性蛋白Fsp1从正常唇腺组织发展到SS的过程中表达增加。Fsp1在10例正常唇腺组织中仅少量间质成纤维细胞表达,其MOD值为0.027±0.006,50例SS唇腺组织中,其MOD值为0.104±0.068,两者比较差异有显著的统计学意义(p<0.01)。随着炎症病变程度的增加,Fsp1的MOD值逐渐升高,轻度0.044±0.012,中度0.105±0.043,重度0.152±0.059。
　　5.间充质细胞标记蛋白Vinmentin正常唇腺组织与SS病变比较,Vinmentin的表达增加,10例正常唇腺组织中,Vinmentin在间质细胞和血管上皮中表达,MOD值为0.009±0.003;SS唇腺组织中可见部分腺体导管上皮细胞和间质细胞Vinmentin呈阳性表达,MOD值为0.027±0.013,与正常组比较差异有统计学意义(p<0.05)。随着病变和纤维化程度增加Vinmentin表达增强,其中轻度0.015±0.007,中度0.023±0.009,重度0.037±0.012。
　　6.临床血清参数与纤维化及EMT指标相关性分析SS患者IgG、球蛋白和γ球蛋白水平随着唇腺病变程度增加而升高;血清IgG、球蛋白和γ球蛋白水平与病变唇腺纤维化程度之间分别存在正相关关系,相关系数分别为r=0.37(p<0.05),r=0.41(p<0.01),r=0.56(p<0.001)。血清IgG与Fsp1、TGF-β1之间存在正相关,相关系数分别为r=0.32和r=0.26(p<0.05),与E-cadherin的表达存在负相关(r=-0.398,p<0.05),与Vinmentin蛋白之间未见明显的相关性。球蛋白和γ球蛋白水平与E-cadherin蛋白表达强度之间存在呈负相关,相关系数分别为r=-0.43(P<0.05)和r=-0.40(p<0.05);γ球蛋白与Fsp1和Vinmentin表达强度存在正相关,相关系数分别为r=0.38(p<0.05)和r=0.452(p<0.05)。
　　结论：
　　1.SS随病变轻、中、重的进展,唇腺腺体小叶萎缩,腺泡破坏增加,粘液物质分泌减少,间质纤维化增加。
　　2.SS病变进程中,上皮细胞标记物E-cadherin在腺泡和导管上皮细胞中的表达逐渐减少,而EMT重要调节因子TGF-β1、特异性蛋白Fsp1和间质细胞标记蛋白Vinmentin的表达在唇腺组织中逐渐增多,部分导管和腺泡上皮呈阳性表达,提示此类细胞逐渐失去了上皮细胞原有特性,逐渐向间质细胞表型转化。
　　3.SS患者血清IgG、球蛋白和γ球蛋白与唇腺病理等级、纤维化和EMT相关指标之间存在相关性,说明自身免疫球蛋白可以影响或促进EMT过程的发生,并且可作为评价唇腺纤维化的间接指标之一。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

缩 略 词

目录

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 标本

2.2 研究方法

2.3 统计分析

第三章 结果

3.1 SS患者临床病例分析及病理特征

3.2观察正常和SS患者唇腺组织中腺体粘液物质分泌的变化

3.3 观察正常和SS患者唇腺间质胶原纤维比例

3.4 E-cadherin在正常和SS患者唇腺组织中的表达

3.5 TGF-β1在正常和SS患者唇腺组织中的表达

3.6 Fsp1正常和SS患者唇腺组织中的表达

3.7 Vinmentin在SS和正常唇腺组织中的表达

3.8 临床实验室指标与唇腺病理等级、间质纤维化相关性分析

3.9 临床参数与E-cadherin 、TGF-1 、Vinmentin和 Fsp1相关性分析

第四章 讨论

4.1 SS唇腺腺体萎缩和间质胶原含量的表达情况

4.2 E-cadherin在SS唇腺组织中表达及其意义

4.3 TGF-β1蛋白在SS唇腺组织中表达及其意义

4.4 Fsp1在SS唇腺组织中表达及其意义

4.5 Vinmentin在SS唇腺组织中表达及其意义

4.6 临床特征与SS唇腺组织纤维化相关性及意义

第五章 结论

参考文献

附图

综述

病因及发病机理研究

SS的临床表现

SS的诊断

SS的治疗

参考文献

致谢

个人简介

汕头大学医学院病理学教研室研究生学位论文真实性与版权归属声明