原核表达人巨细胞病毒UL32、UL44基因及其重组蛋白的抗原性研究

摘要

目的：人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染十分普遍，并且对免疫系统发育不全和免疫抑制患者可引起严重并发症。选择HCMV的UL32、UL44基因抗原性好、特异性强的部分基因片段作为目的片段，应用基因工程技术，在 pET-32a质粒上构建 pET-UL32-UL44表达载体，并在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，鉴定表达蛋白的抗原性。
　　方法：根据Genbank中HCMV的pp150、gp52蛋白序列，利用Protean计算机软件对亲疏水性和抗原性进行分析。选取适合的区段，根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物。应用PCR技术扩增DNA片段，将其克隆到pGEX-4T-1载体测序,核苷酸序列分析证实其正确性。将pGEX-UL44质粒用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，回收切下的UL44片段，连接到经过 BglⅡ和EcoRⅠ双酶切之后的pGEX-UL32质粒，得到pGEX-UL32-UL44克隆。将pGEX-UL32-UL44质粒用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，回收切下的UL32-UL44片段，连接到经过 BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pET-32a载体，构建pET-UL32-UL44重组质粒。将重组质粒导入大肠杆菌 BL21（DE3）菌株，诱导表达，纯化目的蛋白，标记HRP，用ELISA捕获法对目的蛋白的灵敏性和特异性进行评价。
　　结果：本研究成功构建pET-UL32-UL44重组质粒。将重组质粒导入在BL21（DE3）菌株中，经诱导表达后，目的蛋白表达于上清液中。对重组蛋白进行纯化标记后,初步建立了HCMV抗体的捕获法ELISA检测法。检测40份HCMV阳性血清和40份HCMV阴性血清标本，与LIAISON? CMV IgM试剂盒的检测结果比较,具有非常显著的一致性，融合蛋白的灵敏度可达92.5％，特异性可达97.5%，证明了纯化后的重组蛋白具有很好的抗原性。
　　结论：此重组抗原具有良好的抗原性，为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了良好的基础。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

英文缩写词

目录

第一章 前言

1.1 研究背景

1.2 研究意义

1.3 研究目的、思路和方法

第二章 重组表达质粒 pET-UL32-UL44 的构建

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

第三章 目的蛋白的表达及鉴定

3.1实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

结论

参考文献

综述

个人简历及科研情况

致谢