绿原酸抗人皮肤成纤维细胞衰老的研究

摘要

目的：利用乙二醛建立人皮肤成纤维细胞衰老模型，探讨绿原酸在乙二醛致人皮肤成纤维细胞衰老中的保护作用。
　　方法：(一)取幼儿包皮组织进行人皮肤成纤维细胞的原代培养，并采用免疫组化的方法以进一步证实。
　　（二）用MTT法、β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法和实时定量PCR（qRT-PCR）法评价乙二醛及氨基胍对人皮肤成纤维细胞增殖、SA-β-gal阳性率及p16INK4a mRNA表达量的影响。
　　（三）利用不同浓度的绿原酸与乙二醛一起作用于人皮肤成纤维细胞，采用MTT法初步筛选绿原酸适合作用的浓度，然后再检测绿原酸加入后SA-β-gal染色阳性率和p6INK4a mRNA的表达情况。
　　结果：(一)培养出人皮肤成纤维细胞，且免疫组化染色结果显示波形蛋白为阳性，而第八因子相关抗原及细胞角蛋白19为阴性；
　　（二）在加入乙二醛后，人皮肤成纤维细胞的增殖能力下降，SA-β-gal阳性率和p16INK4a mRNA表达量明显升高，与阴性对照组有显著统计学差异(p<0.01)；当氨基胍与乙二醛一起作用于成纤维细胞时，细胞增殖能力升高，SA-β-gal阳性率及p16INK4a mRNA表达量明显下降，与乙二醛组有显著统计学差异（p<0.01），与阴性对照组无统计学差异(p>0.05)；
　　（三）加入绿原酸及乙二醛一起作用于细胞，发现乙二醛对成纤维细胞增殖能力的抑制作用下降，SA-β-gal染色阳性率和p16INK4a mRNA呈剂量依赖性减少的改变,与乙二醛组比有统计学差异（p<0.05），与阴性对照组相比，也有统计学差异（p<0.05）。
　　结论：(一)成功分离培养人皮肤成纤维细胞，并用免疫组化染色进一步证实所培养的细胞为成纤维细胞。
　　（二）利用乙二醛成功建立皮肤成纤维细胞的衰老模型，并用氨基胍验证模型的可行性。
　　（三）绿原酸在乙二醛致人皮肤成纤维细胞衰老中具有保护作用。

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第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1.主要仪器

2 .2主要试剂

2.3实验方法

2.4 统计学分析

第三章 结果

3.1 人皮肤成纤维细胞的原代培养

3.2 人皮肤成纤维细胞衰老模型的建立

3.3绿原酸对乙二醛诱导的细胞衰老的保护作用

第四章 讨论

4.1 成纤维细胞与皮肤衰老

4.2 AGEs、乙二醛与皮肤衰老

4.3 建立细胞衰老模型

4.4 绿原酸对成纤维细胞的保护作用

第五章 结论

参考文献

附录1：文献综述

附录2：在读期间发表的论文

个人简历

致谢