4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建功能SCID荷瘤鼠的抑瘤作用

摘要

目的：建立人免疫重建荷口腔鳞癌重症联合免疫缺陷鼠（severe combined immune deficiency mice，SCID）嵌合模型,并探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。
　　方法：将40只小鼠随机分为5组（4雌+4雄为一组）。对照组(A组)：免疫重建+注射Tca8113细胞；Ad4-1BBL-B7-H3组（B组）：免疫重建+注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞；空载组（C组）：免疫重建+注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞；非免疫重建组（D组)：不给予小鼠免疫重建，注射Tca8113细胞；非肿瘤组（E组）：免疫重建+背部皮下注射PBS。每周定期测量肿瘤体积；ELISA法检测人IgG蛋白含量；流式细胞仪检测SCID鼠外周血中人CD3+、CD56+NKT淋巴细胞比例;DAB显色法观察自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group2 member D,NKG2D)和Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR2)在各组小鼠肿瘤中表达的差异;RT-PCR检测肿瘤中4-1BBL-B7-H3mRNA的表达，RT-qPCR检测肿瘤组织中主要组织相容性复合体1类相关分子A(major histocompatibility complex1 class related molecule A,M1CA)、主要组织相容性复合体1类相关分子B(major histocompatibility complex1 class related molecule B,M1CB)和TLR2 mRNA的表达。
　　结果：①人4-1BBL-B7-H3组小鼠肿瘤体积小于其它组(P<0．05)，肿瘤生长明显受到抑制；②第三、五、七周可在免疫重建组小鼠外周血中测得人IgG；③人4-1BBL-B7-H3组肿瘤中MICA和TLR2表达显著增高，MICB的表达较余各组无显著差异；④RT-PCR证明人4-1BBL-B7-H3基因在4-1BBL-B7-H3组小鼠瘤体内充分表达；⑤DAB显色法观察到人4-1BBL-B7-H3组小鼠肿瘤组织中NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增高；⑥免疫重建鼠均能检测到 CD3+、CD56+NKT细胞，人4-1BBL-B7-H3组高于其它组（P＜0.05）。
　　结论：4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织的表达增强能成功诱导人CD3+、CD56+NKT细胞增殖，直接或间接活化TLR2，上调NKG2D及其配体MICA,MICB的表达，产生有效的抗肿瘤免疫应答。
　　目的：探讨UCA1 mRNA在舌鳞状细胞癌中的表达及其与舌鳞癌病理分级和临床分期关系。
　　方法：采用SYBR Green II实时荧光定量逆转录聚合酶链反应试验方法从6种基因中筛选出在40对舌鳞癌组织及配对正常舌组织样本中表达有明显差异的基因 UCA1，扩大样本量至94例，检测UCA1 mRNA在两者中的表达。应用SPSS13.0软件包统计分析UCA1 mRNA表达量与舌鳞癌患者临床病理学特征的关系。
　　结果：lncRNA UCA1的表达量在舌鳞癌组织均显著升高（P<0.0001），与淋巴结转移有显著相关性（P=0.0371）。过表达UCA1 lncRNA能促进肿瘤转移，但不增加舌鳞癌细胞的增殖能力，其表达水平与舌鳞癌的病理分级有显著的相关性(P=0.0330)。

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英文缩略词表

中文摘要

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前 言

1．协同刺激信号4-1BBL/4-1BB

2．协同刺激信号B7-H3/TLT-2

3．T细胞特殊亚群NKT细胞和γδT细胞

4．本实验室关于4-1BBL、B7-H3的研究基础

5．研究设想

材料和方法

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 统计学数据处理

结果

1. hu PBL-SCID-口腔鳞癌SCID小鼠嵌合模型构建成功

2. 各组SCID小鼠肿瘤生长情况

3. 流式细胞仪检测小鼠体内T淋巴细胞

4. SCID鼠生物学特性及皮下移植瘤外观特点

5. 倒置显微镜观察

7. RT-PCR法检测人4-1BBL/B7-H3mRNA在肿瘤中的表达

8. RT-qPCR检测肿瘤中M1CA、M1CB 和γδT细胞天然免疫受体TLR2 的表达

讨论

展 望

参考文献

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1 病例资料

2 主要试剂盒仪器

3 方法

结果

1. 目的基因在舌鳞癌组织和配对正常舌组织中的表达

2. UCA1在分化不同的舌鳞癌组织的表达

讨论

参考文献

附 录 I

附录II

综述及参考文献

参考文献

致谢