高压氧与抗痫药对外伤性癫痫大鼠模型治疗的初步对比研究

摘要

目的：
　　本研究采用皮层注射氯化亚铁建立外伤性癫痫大鼠模型，从基因等层面上对比高压氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）与一线抗癫痫药物丙戊酸钠（Valproate acid，VPA）对外伤性癫痫（Posttraumatic epilepsy，PTE）的防治作用，并探究其部分治疗机制。
　　方法：
　　1、健康成年雄性 SD大鼠16只，通过皮层注射氯化亚铁法造模，采用随机数表法将存活者分为3组：动物模型组、丙戊酸钠治疗组(VPA治疗组)、高压氧治疗组（HBOT组）。对所有动物模型进行常规治疗，丙戊酸钠治疗组予鼻饲丙戊酸钠，高压氧治疗组予高压氧治疗。观察其行为学与脑电图改变。
　　2、30d后处死动物，在冰上断头取脑，采用 HE染色法观察大脑右侧海马神经细胞损伤情况；运用r-t PCR法检测各样本早期快反应基因c-fos mRNA、c-jun mRNA、c-myc mRNA的表达水平。
　　3、用SPSS19.0软件进行统计学分析。若方差齐，则采用单因素方差分析，组间均数比较采用 LSD检验；若方差不齐，则采用非参数检验的Kruscal-Wallis法，设定 P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1、造模情况：造模16只，成功16只，成功率100％。
　　2、行为学表现：动物模型组动物出现癫痫典型的急性期，静止期及发作期表现；VPA治疗组的癫痫发作频率及持续时间较动物模型组无明显减少；HBOT组的发作频率及持续时间较动物模型组明显减少。
　　3、脑电图表现：动物模型组大鼠表现出多种形式的癫痫样放电波。VPA治疗组大鼠癫痫发作次数无明显减少。而HBOT组癫痫样放电频率减慢和波幅降低，发作次数明显减少。
　　4、病理学表现：动物模型组海马神经元缺失明显，出现典型细胞过度凋亡坏死及胶质细胞增生；VPA治疗组海马神经元缺失明显，神经元变性、死亡程度较重；HBOT组神经元变性、死亡程度较轻。
　　5、PCR结果：
　　5.1、各组c-fos mRNA的表达水平：VPA治疗组c-fos mRNA的表达水平较模型组显著升高，差异有统计学意义（LSD检验，P＜0.01），HBOT组c-fos mRNA的表达水平较VPA治疗组明显下降，差异有统计学意义（LSD检验，P＜0.05）。
　　5.2、各组c-jun mRNA的表达水平：HBOT组c-jun mRNA的表达水平较动物模型组及VPA治疗组均明显下降，差异有统计学意义（K-W检验，P＜0.05）。
　　5.3、各组c-myc mRNA的表达水平：HBOT组及VPA治疗组c-myc mRNA的表达水平较动物模型组显著下降（LSD检验，P＜0.01）。
　　结论：
　　1、从行为学、EEG及病理层面表现显示HBOT对PTE动物模型治疗作用较抗痫药佳。
　　2、从基因层面我们可得出如下推断：
　　2.1、 c-fos基因作用层面分析：HBOT可能通过降低TBI后脑皮质的高兴奋性，抑制 N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体激活及钙离子内流，使得神经细胞c-fos表达下调，从而抑制外伤性癫痫发作。而VPA作用机制则与之相反，故推断其无法从本机制获益。
　　2.2、 c-jun基因作用层面分析：HBOT可通过抑制JNK信号通路的激活，抑制神经元过度凋亡及神经胶质细胞病理性增殖，从而达到抗PTE的效果。而VPA无法抑制JNK信号通路的激活。
　　2.3、 c-myc基因作用层面分析：我们推测HBOT及VPA均可下调c-myc的表达，从而抑制局部神经细胞的过度凋亡，最终抑制PTE发作。
　　3、HBOT通过降低TBI后脑皮质的高兴奋性及抑制JNK信号通路的激活,以达到抗PTE的效果；而抗痫代表药VPA无法通过上述二机制作用而作用欠佳。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

缩略词表

目录

第一章 前言

1.1外伤性癫痫发病机制研究进展

1.2 外伤性癫痫治疗现状

1.3 高压氧对脑外伤作用机制

1.4 脑外伤后快反应基因的表达情况

第二章 方法与材料

2.1 实验动物

2.2 主要试剂

2.3 实验仪器

2.4 SD大鼠分组

2.5 外伤性癫痫大鼠模型的制作

2.6 对动物模型的处理

2.7 标本取样

2.8 相关指标检测

2.9 统计学方法

第三章 结果

3.1大鼠行为学表现

3.2脑电图变化

3.3组织学观察(HE染色）

3.4 c-fos mRNA，c-jun mRNA及c-myc mRNA表达的变化。

第四章 讨论

4.1注射氯化亚铁造外伤癫痫动物模型

4.2.高压氧及丙戊酸钠对外伤性癫痫动物模型治疗作用的对比

4.3 从c-fos基因层面分析高压氧及丙戊酸钠对外伤性癫痫的作用机制

4.4 从c-jun基因层面分析高压氧及丙戊酸钠对外伤性癫痫的作用机制

4.5 从c-myc基因层面分析高压氧及丙戊酸钠对外伤性癫痫的作用机制

4.6 高压氧及丙戊酸钠对外伤性癫痫的作用机制比较

第五章 结论

第六章 附图

参考文献

第八章 发表及投稿文章

外伤性癫痫发病机制研究进展

致谢

个人简介