GSTM1在ER阳性乳腺癌病人紫杉类为基础的新辅助化疗中的预测作用

摘要

背景：乳腺癌具有高度异质性的特点，患者之间存在着明显的个体差异，对乳腺癌患者进行个体化治疗显得极其重要。随着基因组学的发展，很多基因被证明可以预测乳腺癌病人的化疗获益，21基因Oncotype DX检测包括16个肿瘤相关基因和5个参考基因，它的复发评分（RS）被证明可以预测激素受体阳性的乳腺癌患者自辅助化疗的获益程度，评价局部复发、远处转移和死亡的风险。但是在新辅助化疗层面，缺少21基因表达谱检测对于患者疗效预测的相关研究；并且对于最传统有效的含紫杉类化疗方案，也不清楚16个肿瘤相关基因中具体哪个基因可以用来预测病人的治疗反应。
　　方法与结果：我们在本研究的第1部分内容中，采用TaqMan RT-PCR方法对66例激素受体阳性的中国乳腺癌患者的新鲜冻存肿瘤组织进行了21基因表达谱的检测，发现其中GSTM1基因具有表达/不表达多态性。此后患者接受了含紫杉类方案的新辅助化疗，通过对GSTM1表达多态性与病人新辅助化疗后的pCR率进行相关性分析，发现GSTM1表达多态性与ER阳性乳腺癌病人新辅助化疗的疗效相关。
　　为了证实GSTM1基因表达能够影响乳腺癌细胞对多西他赛的化疗敏感性，我们在本研究的第2部分内容中，挑选了GSTM1表达水平不同的五个乳腺癌细胞系进行体外实验。我们用MTT方法检测细胞对多西他赛的化疗敏感性，通过将各个细胞系的多西他赛的IC50值（细胞生长被抑制一半时的化疗药浓度）与四个重要GST同工酶（GSTA1，GSTP1，GSTM1，GSTT1）的表达水平相比较，发现IC50值与GST表达水平呈反比关系。然后选择四个GSTs均高表达且IC50值最高（7.2μM）的MDA-MB-231细胞系进行针对四个GST基因的RNA干扰实验，以确定与多西他赛耐药性相关的GST同工酶。结果发现GSTM1，GSTA1基因敲低的细胞对多系他赛的IC50值降低至3μM，而GSTP1，GSTT1基因敲低对IC50值没有影响。为了进一步验证此关系，我们在对GSTA1及GSTM1转染细胞进行细胞凋亡的检测（TUNEL实验和Hoechst染色）结果发现相对于对照组细胞，两者可以观察到多系他赛处理后明显的细胞凋亡。
　　结论：GSTM1多态性可能可以作为ER阳性乳腺癌病人紫杉类为基础的新辅助化疗的预测指标。同时在乳腺癌细胞系中，GSTM1和GSTA1表达水平与乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性相关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分：材料与方法

1. 入组标准

2. 排除标准

3. 诊断流程

4. 临床特征及病理学检测

5. 治疗计划与评价标准

6.TaqMan RT-PCR检测

第一部分：结 果

第二部分：材料与方法

药物

细胞株

抗增殖实验

Western Blot

Real-time RT-PCR

siRNA转染

Hoechst染色法检测细胞凋亡

TUNEL法检测细胞凋亡

第二部分：实验结果

一、不同细胞的GST同工酶表达不同

二、不同的细胞对多西他赛的敏感性与GST同工酶表达水平正相关

三、在耐药MDA-MB-231细胞中敲低各个GST同工酶

三、si-GSTA1,si-GSTM1转染之后MDA-MB-231细胞对多西他赛耐药性降低

四、si-GSTA1,si-GSTM1转染MDA-MB-231细胞多西他赛处理后凋亡增加

结论

参考文献

在学期间发表的论文

致谢