褪黑素和神经调节蛋白-1对脊髓损伤C57BL/6小鼠功能恢复的作用

摘要

目的:脊髓损伤不仅对中枢神经系统神经通路造成损伤，而且会导致损伤部位胶质细胞产生巨大变化，从而形成胶质瘢痕阻碍脊髓损伤后神经功能的恢复。神经调节蛋白-1（NeureguIin-1，Nrg1）最初作为一类神经调节因子，其在神经损伤修复中有一定的作用，而许多实验证实褪黑素（Melatonin，MT）在对实验性脊髓损伤具有很强的神经保护作用。本课题研究Nrg1和MT对脊髓损伤修复相关分子表达的影响，探讨Nrg1和MT能否限制过度的星形胶质细胞反应，在脊髓损伤后的再生、修复以及神经功能恢复中发挥作用，以及比较Nrg1和MT联合给药治疗脊髓损伤和单独给药治疗脊髓损伤的效果。
　　方法:3月龄C57BL/6雌性小鼠经过压迫性脊髓损伤后，随机分成四组，每组6只，通过鼠尾静脉注射分别连续给予DMSO溶剂、重组Nrg1β、MT和重组Nrg1β+MT7天，正常饲养6周后取其损伤部位脊髓样本。通过免疫组织化学、western blot和免疫荧光研究脊髓损伤相关分子的表达和细胞定位。
　　结果:
　　1.Western blot结果显示：与DMSO溶剂对照组相比，各实验组神经再生相关分子mTOR和Bcl-2表达显著升高(p<0.05)；而不利于损伤后修复分子PTEN、GFAP和Bax的表达下降，无统计学意义。另外，在免疫组化和免疫荧光的实验结果中也表现出同样的趋势。
　　2.行为学评分：脊髓损伤后当天，各组小鼠双后肢运动能力明显受限，BMS评分达到最低分0分。脊髓损伤给药后第二周开始，DMSO溶剂组、Nrg1组、MT组和Nrg1+MT组各组小鼠双后肢的运动能力出现不同程度的恢复。其中，与DMSO溶剂组相比，Nrg1+MT组恢复无明显好转，BMS评分1-2分；而Nrg1组和MT组恢复较好，BMS评分4-5分。
　　结论:
　　1.Nrg1和MT能够抑制脊髓损伤后星型胶质瘢痕的形成和细胞凋亡；
　　2.Nrg1和MT通过激活神经再生相关分子和抑制不利于损伤后修复分子的表达，对脊髓损伤后神经功能的再生和恢复起到一定作用
　　3.Nrg1联合MT对脊髓损伤功能的恢复作用不如单独给药效果好。

目录

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目录

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 伦理声明

2.4 统计学方法

第三章 结果

3.1 免疫组织化学染色结果

3.2 蛋白免疫印迹检测结果

3.3 免疫荧光染色结果

3.4 行为学结果

第四章 讨论

4.1 脊髓损伤模型的构建和脊髓损伤节段的选择

4.2 药物影响GFAP、PTEN的表达

4.3 药物对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

4.4 药物对神经再生相关分子mTOR表达的影响

4.5 Nrg1、MT介导激活ERK信号通路

4.6 Nrg1和MT联合给药治疗脊髓损伤效果不佳

第五章 结论

参考文献

致谢

附录 综述: 神经调节因子-1（Nrg1）激活Nrg1-ErbB信号转导并促进小鼠脊髓损伤修复

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