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ABSTRACT
中英文缩略语表
目 录
第一章 前言
第二章 材料和方法
2.1 主要仪器
2.2 试剂
2.3 相关软件与网址
2.4 细胞培养
2.4.1细胞传代
先弃掉旧的培养液，向里加入适量经高压灭菌的PBS，左右前后摇晃培养皿，清洗2次，在加灭菌的PBS时最
2.4.2 细胞冻存
2.5 RNA提取、纯度鉴定, 反转录及实时定量 PCR
2.5.2 RNA浓度测定与纯度鉴定
我们使用Thermo 公司生产的Nanodrop2000c仪器来进行检测RNA OD260/OD28
2.6 分子克隆
2.7 pmirGLO -HMGB3-3′-UTR质粒的构建、抽提及转染
2.7.1设计引物，PCR扩增合成HMGB3-3'-UTR片段
2.7.2 酶切，连接
2.7.3 转化、挑取单克隆与测序验证
其操作方法同分子克隆中叙述的一致。
2.7.4 质粒抽提
2.8 miRNA mimics及 siRNA转染
2.9蛋白免疫印记
2.10 双荧光素酶报告基因实验
2.11 MTT 实验
2.12划痕实验
2.13 Transwell 迁移实验
2.14 统计分析
第三章 结果
3.1 HMGB3在肝癌细胞和组织样本中的表达升高
图 3-1 HMGB3 在肝癌细胞和组织样本中表达升高
Figure 3-1 Elevated expression of HMGB3 in hepatoc
3.2 miR-200b在肝癌细胞和组织样本中的表达降低
为了考察miR-200b在肝癌中的表达，我们通过搜查TCGA数据库，分析50例正常肝组织和372例肝
Figure 3-2 Low expression of miR-200b in hepatocel
3.3 肝癌患者中HMGB3过表达和miR-200b下调与其预后相关
我们居于在OncoLnc上的TCGA数据库中获得360例肝癌患者中HMGB3的表达数据，对其Kapl
图 3-3肝癌中HMGB3表达升高和miR-200b表达下降与其患者不良预后相关
Figure 3-3 HMGB3 overexpression and low expression
3.4 pmirGLO -HMGB3-3′-UTR质粒的构建结果
我们在pmirGLO vector的基础上来构建包含miR-200b靶点的HMGB3-UTR片段的质
图3-4-1 HMGB3-3'-UTR片段的PCR扩增
Figure 3-4-1 PCR amplification of HMGB3-3'-UTR fra
图3-4-2 HMGB3-3'-UTR片段和空载体的双酶切
Figure 3-4-2 Double-enzyme digestion of HMGB3-3'-U
图 A：pmirGLO空载体的双酶切电泳图。
图3-4-3 pmirGLO -HMGB3-3′-UTR质粒转化之后的菌落PCR
图 A：pmirGLO-HMGB3-NC质粒转化之后菌落PCR的电泳图。
图 B：pmirGLO-HMGB3-200b质粒转化之后菌落PCR的电泳图。
图3-4-4 pmirGLO -HMGB3-3′-UTR质粒鉴定
注：1: pmirGLO vector 2: pmirGLO-HMGB3-NC 3: pmirGLO
3.5 miR-200b 通过与 HMGB3 的 3’-UTR 相互作用下调HMGB3 的表达
图 3-5 MiR-200b通过靶向HMGB3 mRNA 3’-UTR来调控HMGB3 的表达
Figure 3-5 MiR-200b regulates HMGB3 expression by
3.6 干扰 HMGB3 的表达可抑制HepG2细胞的增殖和迁移
图 3-6降低HMGB3的表达抑制了HepG2细胞的增殖和迁移
Figure 3-6 Silencing of HMGB3 inhibits HepG2 cell
3.7 过表达miR-200b的表达可抑制HepG2细胞的增殖和迁移
图 3-7上调miR-200b的表达抑制了HepG2细胞的增殖和迁移
Figure 3-7 Upregulation of miR-200b inhibits HepG2
第四章 讨论
第五章 结 论
参考文献
致 谢
个人简历
