汉防己甲素对人肺腺癌细胞的放射增敏作用及其机制的实验研究

摘要

目的： 临床上一些肿瘤对放射治疗并不敏感，为提高放疗效果人们采用了各种方法。其中化学药物的增敏作用是研究的热点之一。本研究旨在观察汉防己甲素对人肺腺癌细胞的放射敏感性的影响，并初步研究其作用机制。以明确汉防己甲素对人肺腺癌细胞是否有放射增敏作用及其机理。为临床应用的开展提供一定的理论基础。 方法： 1、本研究的靶细胞为体外培养的人肺腺癌SPC-A1细胞。采用MTT法检测汉防己甲素对SPC-A1细胞的细胞毒作用。将SPC-A1细胞分为不同浓度汉防己甲素处理组，并设立阴性对照组。分别在24h、48h和72h时检测OD值，并据其计算出半数抑制浓度。 2、根据细胞毒实验的结果，选择1μmol/L浓度的汉防己甲素来进行增敏研究。采用MTT法来比较单纯照射4Gy、照射4Gy后进行汉防己甲素处理、单用汉防己甲素及对照组之间OD值的差异和细胞抑制率的差异。 3、采用克隆形成法来研究汉防己甲素对SPC-A1细胞的放射敏感性的影响。将两组的数据分别采用多靶单击模型和线性二次方程来拟合细胞存活曲线，并计算放射敏感性参数D0、Dq、α/β、SF2，以比较汉防己甲素对SPC-Al细胞的增敏作用。 4、采用流式细胞术来研究汉防己甲素对SPC-Al细胞放射增敏作用的机制。检测不同浓度的汉防己甲素处理组和照射后进行汉防己甲素处理组的G2期细胞数的比例。以证实辐射是否会引起SPC-Al细胞的G2期阻滞，以及汉防己甲素是否有清除由辐射导致的SPC-Al细胞的G2期阻滞的作用。 结果： 1、不同浓度的汉防己甲素作用于人肺腺癌SPC-Al细胞，在24h、48h及72h时其细胞毒作用均呈浓度依赖性。其24h、48h、72h半数抑制浓度(IC50)分别为：10.77μmol/L、5.78μmol/L、和3.89μmol/L。 2、MTT法检测结果显示照射后加汉防己甲素组的OD值较单纯照射组降低(p<0.05)，细胞抑制率较单纯照射组提高(p<0.05)，提示汉防己甲素提高了X射线对SPC-Al细胞的杀伤作用。 3、克隆形成实验结果显示汉防己甲素降低了受到照射后的SPC-Al细胞的克隆形成率。据存活分数拟合细胞存活曲线计算出的表示放射敏感性的指标D0、Dq、α/β、SF2均提示汉防己甲素提高了放射敏感性(p<0.05)。放射增敏比(SER)按多靶单击模型计算为1.48，按线性二次方程(L-Q模型)计算为1.414、流式细胞仪检测细胞周期的结果显示照射导致了SPC-Al细胞的G2期阻滞(p<0.01)。加用汉防己甲素后可以清除这种阻滞(p<0.01)，各个浓度之间无明显的量效关系。 结论： 汉防己甲素可以有效增加人肺腺癌SPC-Al细胞的放射敏感性，其机制可能是通过清除放射导致的细胞G2期阻滞，从而使DNA的损伤固定，发生增殖性死亡。

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综述：细胞周期调控与汉防己甲素的放射增敏作用

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