胰腺癌预后多因素分析、siRNA干扰TMPRSS4表达对SW1990细胞生长侵袭的影响

摘要

第一章：胰腺癌预后多因素分析
　　 前言：胰腺癌为消化系统高度恶性肿瘤，发病率为癌症发病率的2.5％，位于第十位，但死亡率为所有癌症病人死亡率的6％，位于第四位，中位生存期仅为3～6个月，总的五年生存率不足5％。胰腺癌在确诊的时候多半已经转移，而手术为治疗胰腺癌的最为有效的手段，仅有15％～20％的可切除率。因此提高胰腺痛早期诊断率和病人生存率为临床研究的重要课题。
　　 目的：探讨胰腺癌的流行病学、临床特点、实验室检查、影像学检查，为早期诊断提供新思路，探讨影响胰腺痛预后的因素，为提高病人生存率提供新方法。
　　 方法：收集2002年1月至2007年1月我院收治的有完整随访资料的280例胰腺癌患者，对所有病例进行病例资料收集并随访。采用Kaplan-Meier及寿命表计算生存率，log-rank检验进行影响预后的单因素分析，对符合条件的纳入COX比例风险模型进行多因素分析。
　　 结果：本组病例中，91.8％患者的年龄大于40岁，高峰年龄在50-73岁之间；89.3％患者进行联合B超和CT检查，敏感性分别为70.6％、95.3％，CA-199敏感性为80.8％。中位生存期为(7.00±0.52)个月，1-5年生存率分别为28.0％、9.0％、6.0％、2.0％、1.0％。单因素分析结果提示年龄>65岁、CA-199>均数、TNM Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴结侵犯、大血管侵犯、远处脏器转移、非手术治疗、KPS评分<60、无黄疸、有腹水、无胰腺病史、体重下降()5Kg、胰体位癌等都是预后不良的因素；COX多因素分析结果表明，治疗方式、年龄、TNM分期、KPS评分和有无腹水是影响患者预后的独立危险因素。
　　 结论：1、胰腺癌恶性程度高，早期诊断率低，确诊时仅16.8％有根治性手术机会，55.7％已经有远处转移，胰腺体尾部癌较胰头癌更易转移，转移最多的器官为肝脏，转移与性别年龄无关。2、不断更新的用于胰腺痛的诊断技术并没有明显提高早期诊断率与生存率，重视对胰腺癌高危人群的监测为胰腺癌早期诊断的可靠方法。
　　 第二章：siRNA干扰TMPRSS4表达对SW1990细胞生长侵袭的影响
　　 前言：高度恶性和转移是胰腺痛的突出特征之一。胰腺为腹膜后位器官，胰腺癌患者早期症状缺乏特异性，由于早期诊断困难，疗效差。所以，寻找新的治疗思路，以提高胰腺痛患者的预后及生活质量成为亟待解决的问题。
　　 早期易侵犯周围组织器官和远处转移是胰腺癌的生物特性，同时也是胰腺痛患者预后极差的最主要因为。肿瘤侵袭转移是一个复杂的过程，目前已阐明的肿瘤侵袭转移主要是肿瘤细胞侵犯和破坏周围正常组织的过程，其中细胞外基质(extracellular matrix，ECM)降解是肿瘤侵袭转移的关键步骤。以蛋白水解方式来降解细胞外基质，为肿瘤细胞转移铺平道路，是肿瘤转移和浸润的必需步骤，这一过程主要由四类内肽酶调节，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶和金属蛋白酶。肿瘤转移方面的最新研究认为在丝氨酸蛋白酶中，TTSP家族在肿瘤转移复杂过程中可能有重要作用。Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(type Ⅱ transmembrane serine proteases，TTSP)属于一类丝氨酸蛋白酶，表达在某些器官和肿瘤组织的细胞表面中，具有潜在的降解细胞膜和细胞外基质的功能，从而有利于肿瘤细胞的扩散和转移。近年来不少研究发现部分TTSPs在某些肿瘤出现表达改变，认为可能与这些肿瘤细胞的增殖、浸润和转移有关。
　　 TMPRSS4是Wallrapp等在2000年从胰腺癌中通过cDNA-RDA方法分离出的糜蛋白家族中的一个新的丝氨酸蛋白酶，属于TTSP的新成员，在胰腺痛及其他肿瘤中高表达，蛋白结构上具备所有TTSP的结构特征。功能上有胰酶样活性，可能在肿瘤转移及肿瘤浸润中有重要作用。H，jung等人研究证实，TMPRSS4过表达诱导了E-钙粘蛋白介导的细胞粘连丧失，从而促进表皮细胞/间质细胞间过渡，造成痛细胞转移能力、侵袭性和恶性程度都明显增加。这些研究结果都提示TMPRSS4正向参与了胰腺癌浸润转移的致病过程，但仍需进一步证实。TMPRSS4是否可以作为胰腺癌诊断与预后评价的新指标有待进一步研究。
　　 基于这些研究背景，本实验拟在已有研究的基础上，研究胰腺痛组织中TMPRSS4的表达及临床意义；通过RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术阻断胰腺痛SW1990细胞中TMPRSSS4基因的功能表达，研究沉默TMPRSS4后细胞的增殖及侵袭行为的变化，为阐明TMPRSS4与胰腺癌浸润转移的正向关系提供证据，并为临床上胰腺痛TMPRSSS4基因治疗提供理论及实验依据。
　　 目的：检测胰腺癌组织中Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(type Ⅱ transmembraneserine proteases 4，TMPRSS4)的表达及临床意义。构建靶向TMPRSS4特异性干扰RNA质粒，转染SW1990细胞后，培养稳定的转染质粒的细胞株，研究RNA干扰(RNA interference，RNAi)对胰腺痛SW1990细胞TMPRSS4基因、蛋白以及细胞生长侵袭的影响，为将来进一步研究TMPRSS4在胰腺癌中的生物学功能及胰腺痛抗迁移与侵袭治疗提供基础。
　　 方法：RT-PCR检测组织中TMPRSS4的表达，初步探讨TMPRSS4在胰腺癌病人中表达的差异。构建靶向TMPRSS4基因的小干扰RNA(small interferingRNA，siRNA)真核表达质粒载体，转染SW1990细胞，实时定量PCR(Real-timeQuantitative Polymerase ChainReaction，RQ-PCR)检测各质粒载体对TMPRSS4基因的干扰效率，筛选出干扰效率最高的质粒载体，并进行稳定克隆筛选培养，Western-blot进一步验证蛋白表达水平，Transwell小室检测TMPRSS4沉默后细胞迁移和侵袭能力的改变；CCK-8法检测TMPRSS4沉默后细胞体外增殖的变化。
　　 结果：9例确诊为胰腺癌，TMPRSS4阳性6例，阳性率为66.7％，3例慢性胰腺炎组织TMPRSS4表达均阴性。5例有远处转移的胰腺癌组织TMPRSS4表达均阳性，3例无远处转移者1例阳性。胰腺癌的远处转移组TMPRSS4阳性率高于非转移组。荧光定量PCR、westen-blot分别检测TMPRSS4的干扰效率为80.1％、60％。Transwell小室检测SW1990/p-siTMPRSS4组细胞的迁移抑制率与侵袭抑制率分别为32.1％、24.5％；CCK8检测空白对照组、空载体组与TMPRSS4组细胞增殖状态无明显差异(P>0.05)。
　　 结论：TMPRSS4的阳性表达与胰腺痛转移相关，经脂质体转染及G418筛选成功构建SW1990/p-siTMPRSS4细胞株；沉默TMPRSS4基因后SW1990细胞的迁移与侵袭能力明显抑制，但细胞增殖与对照组相比无明显变化；阻断TMPRSS4基因的表达有望成为胰腺癌基因治疗的新途径。

目录

文摘

英文文摘

第一章 胰腺癌预后多因素分析

前言

1.资料与方法

2.结果

3.讨论

4.结论

参考文献

第二章 siRNA干扰TMPRSS4表达对SW1990细胞生长侵袭的影响

前言

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

5.结论

参考义献

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