TRPC1蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义

摘要

研究背景与目的：
　　 鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我国常见的头颈部恶性肿瘤之一，好发于东南亚地区及我国南方各省市，在中国南方以及国外的中国南方移民和后裔中发病率明显高于欧美等其他地区25至30倍。目前认为鼻咽癌的发生、发展是一个多因素、多阶段、多步骤的复杂过程，与EB病毒感染、遗传易感性、饮食习惯、环境污染等有关。鼻咽癌多发生于鼻咽部的咽隐窝和顶后壁，解剖位置比较隐蔽，临床表现复杂且不典型，容易漏诊、误诊。因此，约70％的鼻咽癌患者初诊时已是局部区域晚期。
　　 由于鼻咽癌分化程度低，周围淋巴组织丰富，容易发生颅内外和颈部淋巴结转移。放射治疗是鼻咽癌的首选治疗手段，但在单纯放疗后局部复发和远处转移率很高，放疗后的五年生存率仍徘徊在50％左右。因此，为了提高鼻咽癌患者的诊疗水平，迫切需要寻找鼻咽癌发生、发展和预后相关的分子标志物及新的靶点。
　　 瞬时受时电位(transientreceptorpotential，TRP)是位于细胞膜上的一类非电压依赖性的阳离子通道。在1969年Cosens和Manning在研究果蝇光感受器TRP突变体时发现:突变体果蝇对持续的光刺激不产生持续的峰电位，而是产生瞬时的去极化电位。与其他阳离子通道结构相似，TRP通道也具有6个跨膜拓扑结构(S1～S6)，其N末端和C末端位于细胞内，且在第5个和第6个跨膜域间有一个离子通道孔区域。根据TRP通道的氨基酸序列和结构同源性，可将哺乳动物的TRP超家族分为六个亚家族:TRPC(Canonical)、TRPM(Melastatin)、TRPV(Vanilloid)、TRPA(Ankyrintransmembraneprotein)、TRPP(Polycystin)、TRPML(Mucolipin)。
　　 TRPC1是第一个被克隆的哺乳动物TRP通道，与果蝇TRP有34％左右的同源性，全长的人TRPC1蛋白分子量约91kDa，编码该蛋白的基因位于人3号染色体的q22-q24区，位于小鼠的9号染色体上。TRPC1蛋白的氨基酸序列在人类、大鼠、小鼠、兔和牛中具有高度保守性。TRPC1蛋白广泛分布于平滑肌、脑、心脏、睾丸、附睾、卵巢、唾液腺、肝和肾上腺等组织中，主要参与细胞膜受体激活磷脂酶C后所介导的钙离子进入，被认为是钙库操纵性钙离子通道(SOC)的核心成分，通过调节细胞内Ca2+稳态，在细胞增殖、分化、凋亡等起重要作用。
　　 细胞内Ca2+的变化是影响细胞生理功能的重要因素，也是多种受体激活后信号转导过程中的关键，而细胞内Ca2+变化则依赖于Ca2+跨膜转运和细胞内钙库释放和再摄取Ca2+等过程维持动态平衡。Ca2+稳态在细胞增殖和凋亡、细胞分化、细胞迁移、基因转录、血管生成、平滑肌收缩、唾液腺及神经递质的分泌等生理功能中起重要作用。瞬时受体电位(TRP)通道可以作为细胞膜Ca2+通道调节细胞内Ca2+浓度，也可以通过改变细胞膜极性，调节Ca2+驱动力来调节细胞内Ca2+浓度。而且，TRP通道还可在细胞内钙库的膜上表达，触发细胞的增殖和异常分化，并抑制凋亡，从而导致肿瘤不可控制的扩散和侵犯。TRPC1蛋白作为TRP蛋白一员，参与调节细胞内Ca2+浓度。当TRPC1基因沉默或者TRPC1蛋白低表达，钙离子内流减少，细胞内自由Ca2+浓度降低，反之，TRPC1蛋白过表达，钙离子内流增加，细胞内自由Ca2+浓度升高，钙离子稳态破坏，进而促进细胞的异常分化和增殖。
　　 已有研究发现TRPC1在哮喘和慢性阻塞性肺病中有重要作用，在增殖的气道平滑肌细胞中TRPC1表达增加，已经被预期成为预防周围气道纤维化的潜在的靶标。TRPC1蛋白在大鼠缺血性大脑损伤中表达升高。YassineE(l)Hiani等发现:乳腺癌细胞株MCF-7表达TRPC1蛋白，高细胞外钙离子[Ca2+]o刺激，促进TRPC1蛋白过表达，促进Ca2+内流，ERK1/2磷酸化，激活了依赖钙离子感受器(CaR)的在细胞增殖途经，从而导致细胞的异常增殖，MCF-7细胞经2-APB、SKF-96365和siRNA技术处理后，TRPC1表达下调或者功能抑制，CaR产生的细胞Ca2+内流被抑制，细胞增殖被抑制。这个研究结果表明Ca2+内流需要TRPC1，TRPC1在维持[Ca2+]i和细胞增殖过程中起重要作用。BenjaminBeck等认为TRPC1和TRPC4蛋白在角化细胞的Ca2+的平衡和细胞分化中起重要作用，基底癌细胞可能缺乏这两种蛋白而导致分化障碍。TRPC1蛋白及mRNA在人前列腺癌LNCaP细胞表达，参与调节Ca2+内流。VandenAbeele等发现TRPC1、TRPV6可能构成前列腺癌细胞的SOCs，当前列腺癌细胞向雄激素抵抗表型转化时，这两个蛋白表达降低。ValerieC.Bomben等研究发现TRPC1在人神经胶质瘤细胞的迁移中起重要作用。TRPC1蛋白的破坏，导致神经瘤细胞不全分裂，细胞增殖减慢。
　　 因目前尚无TRPC1蛋白在肿瘤组织中的表达的研究，本研究拟利用组织芯片技术及免疫组化技术检测TRPC1蛋白在人体常见肿瘤组织及其癌旁组织中的表达;检测鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中TRPC1蛋白的表达，分析其与鼻咽癌患者临床特征的关系，同时，结合临床随访资料回顾性的分析TRPC1蛋白表达与鼻咽癌患者总生存期(OS)的关系，为鼻咽癌诊断、预后预测和肿瘤治疗提供初步的理论基础。
　　 研究方法：
　　 1.TRPC1蛋白在人体常见恶性肿瘤组织及癌旁组织中的分布及表达
　　 应用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测TRPC1蛋白在人体常见肿瘤组织及癌旁正常组织中的分布及表达。
　　 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌和慢性炎症组织中的表达及临床意义
　　 应用免疫组织化学方法检测TRPC1蛋白在24例鼻咽慢性炎症和138例鼻咽癌组织中的表达情况;分析TRPC1蛋白表达水平与鼻咽癌各临床病理参数之间的关系;分析TRPC1蛋白表达及各临床病理参数与鼻咽癌总生存期的关系;建立COX回归模型，对各项指标与生存期的关系进行统计学分析。
　　 3.统计学方法:
　　 采用SPSS13.0软件进行统计分析，采用x2检验比较鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中TRPC1蛋白的表达率;采用Wilcoxon秩和检验对鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织间TRPC1蛋白的表达强度进行统计学分析，采用x2检验对TRPC1蛋白表达与鼻咽癌患者的性别、年龄、病理类型、血清EBV-IgG状态、有无颅底侵犯、T分期、N分期及TNM分期等临床病理参数的关系进行统计学分析，采用Kaplan-Meier法对TRPC1蛋白表达及各临床病理参数与鼻咽癌患者的OS关系进行统计学分析;建立COX回归模型，对各项指标与总生存时间的关系进行统计学分析。以双侧P＜0.05认为具有统计学差异。
　　 研究结果：
　　 1.TRPC1蛋白在人体常见肿瘤组织及癌旁正常组织中的分布和表达情况
　　 TRPC1蛋白广泛表达于乳腺、食管、胃肠、肝、肺脏、咽、喉、胰腺等癌旁正常组织中，并在相应的肿瘤组织中也有表达。其中，TRPC1蛋白在乳腺非浸润性导管癌、食管鳞癌、直肠腺癌、肝细胞肝癌、肾透明细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、咽鳞癌、喉鳞癌、鼻咽癌等肿瘤组织中高表达，在结肠腺癌、肺鳞癌、胃癌、前列腺癌组织中中度表达，在宫颈癌和胰腺癌中低表达。
　　 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌及鼻咽组织慢性炎症中的表达
　　 TRPC1蛋白主要表达于细胞的胞浆。在138例鼻咽癌组织中，TRPC1蛋白表达总的阳性表达率为84.1％(116/138)。在116例阳性表达癌组织中，(+)44例，(++)44例，（+++）28例，高表达率为52.2％。而在24例鼻咽慢性炎症组织中，6例无TRPC1蛋白表达，TRPC1蛋白阳性表达率为75.0％(18/24)，其中(+)13例，（++）3例，（+++）2例，高表达率为20.8％。鼻咽癌组织TRPC1蛋白的高表达率(52.2％)显著高于鼻咽慢性炎症组织(20.8％)(P＜0.05)。鼻咽癌组织TRPC1蛋白的表达强度显著高于鼻咽慢性炎症组织。
　　 3.TRPC1蛋白在鼻咽癌组织中的临床意义
　　 TRPC1蛋白表达与鼻咽癌患者的性别、年龄、组织病理学类型、血清EBV-IgG状态无关(P值分别为:0.155，0.423，0.647，0.811)，与患者有无颅底侵犯、T分期、N分期、TNM分期有关(p值分别为:0.001，0.004，0.049，0.013)。随访发现TRPC1蛋白高表达的鼻咽癌患者中位生存时间为50.0个月，而TRPC1蛋白低表达者中位生存时间为86.0月。TRPC1蛋白高表达的鼻咽癌患者中位生存期显著低于TRPC1蛋白低表达者（P=0.000）。将TRPC1蛋白表达及鼻咽癌患者各临床病理参数与鼻咽癌患者总生存期的关系进行统计学分析，结果显示性别、年龄、血清EBV-IgG状态、组织病理学分型不影响鼻咽癌患者的总生存时间(P值分别为:0.417，0.401，0.785，0.837)，而TRPC1蛋白表达、颅底侵犯、T分期、N分期和TNM分期是影响鼻咽癌患者生存的因素（p值均＜0.05）。COX比例风险模型分析发现TRPC1蛋白表达、N分期、颅底侵犯是影响鼻咽癌患者总生存时间的独立危险因素(p值均小于0.05)。
　　 结论：
　　 1.TRPC1蛋白人体常见肿瘤及癌旁正常组织中广泛表达，并在多种类型肿瘤组织中表达上调，提示TRPC1肿瘤的发生、发展中具有特殊的意义，值得进一步探讨;
　　 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌组织中高表达，而在鼻咽慢性炎症组织中低表达，提示TRPC1有可能作为对鼻咽癌诊断及鉴别诊断有参考价值的生物标志物;
　　 3.TRPC1蛋白在与颅底侵犯、T分期、N分期、TNM分期相关，TRPC1低表达的鼻咽癌患者中位生存时间明显长于TRPC1蛋白高表达者，提示TRPC1蛋白是鼻咽癌不良预后的生物学标志物，为鼻咽癌的治疗提供潜在靶点。

目录

摘要

前言

第一章 TRPC1蛋白在人体常见肿瘤及癌旁组织中的表达

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果

1．4 结论

第二章 TRPC1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

全文小结

参考文献

缩略语中英文对照

攻读硕士学位期间成果

致谢

声明

统计学审稿证明