PTEN在三种病理性妊娠患者胎盘组织中的表达及意义

摘要

研究背景：
　　 氧化应激是指活性氧(ROS)生成和抗氧化防御系统之间的不平衡状态。氧化应激诱导的血管内皮功能紊乱在诸如缺血-再灌注损伤、高血压、糖尿病及动脉粥样硬化等血管性疾病中具有重要作用。
　　 近年来病理妊娠的发病机制始终是产科领域的研究热点，许多研究表明病理妊娠存在明显的氧化应激水平。子痫前期(PE)、胎儿生长受限(FGR)和妊娠期糖尿病(GDM)是三种常见的病理性妊娠，常伴发较高的孕妇及围产儿病死率，对妊娠结局影响严重。
　　 目前子痫前期的病因学说很多，如异常滋养细胞侵入子宫肌层、免疫损伤、血管内皮细胞损伤、遗传因素、营养缺乏及胰岛素抵抗等，其中血管内皮细胞损伤是子痫前期病理生理变化的中心环节，是各种致病因素介导于妊高征的共同通路，而血管内皮细胞损伤与氧化应激密切相关。有研究证明氧化应激学说可能是子痫前期发病的主要机制之一，许多学者发现子痫前期患者体内氧化系统及抗氧化系统的平衡遭到了破坏，其中氧化作用增强，抗氧化能力相对减弱，使得机体处在一种高氧化应激状态。FGR是一种多病因疾病，40％的患者病因不明确，其主要危险因素分为母体因素、胎儿因素、胎盘因素、脐带因素，在各项危险因素中任一个环节异常均可导致FGR的发生。现有大量研究表明FGR的发生与脂质过氧化增强及抗氧化系统活性减弱有关。近期研究表明妊娠期糖尿病的发生、发展与氧化应激密切相关，妊娠期糖尿病患者的血清脂质过氧化产物表达水平较正常孕妇是升高的。有学者试验证明糖尿病患者的血浆中含有较高水平的硫巴比妥反应物质及脂质氢过氧化物，两者均是脂质过氧化的经典标志物，提示糖尿病与氧化应激之间直接存在一定关系。
　　 第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)是1997年发现的具有蛋白和脂质磷酸酶双重活性的抑癌基因，PTEN作为一种新型的抑癌基因，在细胞周期调控、促进细胞凋亡、抑制细胞黏附和迁移、抑制血管内皮细胞增殖等多种生理活动中发挥重要作用。PTEN在很多正常组织中表达，在胚胎发展的早期，如胃、肝、中枢和外周神经系统等均有PTEN表达。现已有大量的文献证实，很多癌症的发生与PTEN表达的缺失密切相关，推测PTEN在各组织器官的表达变化可能与在疾病中的突变有重要关系。
　　 近年来，很多研究发现PTEN与氧化应激存在一定的关系。在癌症患者体内存在高水平的氧化应激状态，可能抑制了PTEN的表达，影响了细胞正常调节机制，从而导致癌症的发生。林艳等研究发现胃腺癌患者体内存在过高的氧化应激水平及过低的抗氧化水平，机体抗氧化能力下降有可能降低抑癌基因PTENmRNA和FOXO3a mRNA的表达。PTEN属于蛋白酪氨酸磷酸酯酶家族成员，PTEN是对氧化调控最敏感的成员之一，氧自由基H2O2对PTEN能进行可逆性的氧化调控。H2O2可以氧化灭活PTEN，参与PTEN/PIP3/AKT信号转导已在很多实验中证实。国外学者研究表明，H2O2能引起PTEN蛋白催化中心的124位半胱氨酸残基发生氧化，该124位的残基能与74位的半胱氨酸残基形成二硫键，抑制PTEN磷酸酯酶活性呈时间、剂量依赖性。何建秋等分别通过用不同浓度葡萄糖和H2O2干预INS细胞，检测发现细胞ROS浓度随之逐渐增高，高糖和H2O2干预INS细胞的PTEN表达明显下降，提示葡萄糖代谢引起INS-1细胞内的ROS升高通过抑制PTEN基因表达而参与了胰岛素分泌的信号途径。另外有国内学者建立了体外条件敲除PTEN基因的小鼠胚胎成纤维细胞系模型，发现PTEN基因缺失后细胞内过氧化氢酶和Mn-SOD基因转录水平降低，胞内过多ROS形成氧化压力，导致细胞脂质氧化损伤，由此推测PTEN可降低细胞内基础ROS水平，增强细胞的抗氧化防御能力，在保护细胞免于氧化损伤、维持细胞内氧化还原环境有着重要作用。
　　 PTEN作为一种抑癌基因，近年来在肿瘤方面取得了很大的进展;而关于PETN与子痫前期、妊娠期糖尿病、胎儿生长受限这些疾病的相关研究相对较少;PTEN蛋白在人体很多正常组织有表达，但在胎盘组织的相关研究较少。
　　 研究表明PTEN与氧化应激密切相关，PTEN蛋白受到氧化还原调节，近期国内学者研究发现PTEN蛋白具有抗氧化作用，而这些妊娠合并症的发生与机体内的氧化抗氧化失衡的状态密切相关，这些病理妊娠体内不同程度的氧化应激状态是否会影响PTEN的表达？
　　 研究目的：
　　 本研究通过运用免疫组化方法检测了子痫前期、胎儿生长受限、妊娠期糖尿病及正常孕妇胎盘组织中PTEN蛋白的表达情况，分析了PTEN蛋白的表达水平与这些疾病的严重程度是否相关，初步探讨PTEN蛋白在这些胎盘源性疾病的作用，为疾病治疗提供新的思路。
　　 研究方法：
　　 1.于2012年2月至2013年1月收集在我院住院分娩的子痫前期、FGR、妊娠期糖尿病患者及正常对照组的胎盘组织标本，所取的新鲜标本组织放至10％中性福尔马林液中固定以备免疫组化检测。
　　 2.运用免疫组化的方法检测了子痫前期、FGR、妊娠期糖尿病及正常孕妇胎盘组织中PTEN蛋白表达水平的是否存在差异。
　　 3.采用免疫组化半定量图像分析法检测子痫前期组、FGR组、妊娠期糖尿病及正常孕妇组胎盘中PTEN蛋白的表达水平，用Imageproplus图像分析技术测量PTEN蛋白的平均光密度(IOD)。
　　 4.采用SPSS13.0统计软件统计，数据资料用(x)±s形式表示，两样本间采用两组间独立样本t检验，所测PTEN因子检测值组间比较时采用One-Way ANOVN检验（LSD-t检验，Dunnett's T3检验）;P＜0.05差异具有统计学意义。
　　 结果：
　　 1.PTEN蛋白在子痫前期组和正常孕妇组胎盘中的表达情况
　　 免疫组织化学法检测结果显示，PTEN蛋白主要表达于胎盘组织血管内皮细胞的胞质和胞核，蓝色为细胞核，棕黄色或淡黄色颗粒为阳性表达，偶见滋养细胞。与正常对照组比较，轻度子痫前期组、重度子痫前期组PTEN蛋白表达水平降低，均具有显著性差异(P＜0.05);重度子痫前期组PTEN水平低于轻度组，具有显著性差异(P＜0.05)。
　　 2.PTEN蛋白在子痫前期合并FGR组、单纯FGR组和正常孕妇组胎盘中的表达情况
　　 实验表明，单纯FGR组与正常对照组PTEN蛋白水平比较，低于正常孕妇组，未见显著性差异（P＞0.05）;子痫前期合并FGR组的PTEN水平低于单纯FGR组和正常孕妇组，均具有显著性差异(P＜0.05)。
　　 3.PTEN蛋白在GDM组和正常孕妇组胎盘中的表达情况
　　 结果显示，PTEN蛋白表达于胎盘组织的细胞质和胞核，可见深褐色或淡黄色颗粒，阳性表达细胞主要为血管内皮细胞，可见部分合体滋养细胞有阳性反应。妊娠期糖尿病组与正常对照组PTEN水平比较，具有显著性差异（P＜0.05）。
　　 结论：
　　 1.PTEN蛋白在正常对照组胎盘组织中有表达，主要表达于血管内皮细胞，提示PTEN可能在维持正常妊娠中起一定的作用。
　　 2.子痫前期组PTEN蛋白表达水平降低，且随着病情加重而降低;提示PTEN可能成为评估子痫前期患者病情的一个新指标。
　　 3.在子痫前期合并FGR组和GDM组，PTEN蛋白表达显著降低，提示PTEN表达异常可能与这些疾病相关。

目录

摘要

前言

材料与方法

一、主要仪器与材料

二、实验方法

结果

一、PTEN蛋白在子痫前期组和正常对照组胎盘组织的表达情况

二、PTEN蛋白在胎儿生长受限组和正常对照组的胎盘组织表达

三、PTEN蛋白在妊娠期糖尿病组和正常对照组胎盘组织的表达情况

讨论

一、氧化应激与子痫前期、胎儿生长受限、妊娠期糖尿病

二、PTEN的生物学功能与氧化应激

三、PTEN在相关妊娠合并症及正常胎盘组织中的表达及意义

结论

本研究存在的不足和展望

参考文献

中英文缩写一览表

综述 PTEN与氧化应激

硕士期间发表的论文

致谢

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