IL-6通过上皮-间质转化诱导CD44+CD24-/low细胞的产生促进了乳腺癌MCF7细胞的恶性行为

摘要

乳腺癌严重危害着女性的生命和健康，是全球女性最常见的恶性肿瘤，在北美、北欧一些国家，乳腺癌发病率占所有女性恶性肿瘤的25％～30％，半个多世纪以来，对乳腺癌的基础和临床研究都取得了很大的进展，提高了临床治疗效果，在发达国家乳腺死亡水平已经在10多年前发生转折，由持续上升转为显著下降。亚洲乳腺癌发病水平在国际上居中等水平，但增长趋势明显，死亡率相对较高，与发达国家相比，中国的乳腺癌发病年龄较早，2008年，我国小于65岁乳腺癌患者占所有乳腺癌患者的83.4％，中国乳腺癌患者确诊的平均年龄为45～55岁，乳腺癌有两个发病高峰:45～55岁及70～74岁。众所周知，月经周期长、未生育、初次生育年龄较大、不哺乳等是乳腺癌的危险因素，对于中国女性来说，独生子政策使得这些因素更为突出，多生孩子有助于降低乳腺癌风险，此外，肥胖、高脂肪饮食和运动不足也增加乳腺癌风险。通过早发现、早诊断、早治疗等二级预防及乳腺癌系统治疗的逐渐完善的三级预防，乳腺癌的发展已经得到有效的控制，病死率有下降的趋势。早期乳腺癌治疗效果已经相当好，五年生存率在90％以上，但不管乳腺癌治疗多有效，总还有30％～40％的乳腺癌患者最后会复发、会出现耐药。随着研究的不断深入，肿瘤干细胞(cancerstem cells，CSCs)学说被科学家提出，他们认为肿瘤干细胞是肿瘤中极小部分具有自我更新、无限增殖及分化潜能的细胞，肿瘤之所以能具有无限增殖能力，其根本在于肿瘤细胞中存在占极少数量的肿瘤干细胞。肿瘤干细胞被认为是肿瘤复发、转移及治疗抵抗的根源，它对化疗和放疗都会产生抵抗。研究发现通过EMT过程能将永生化人乳腺上皮细胞(HMLEs)诱导成具有干细胞特征的乳腺癌干细胞，为EMT在肿瘤细胞的转移及促进生长中的作用提供了证据，且建立了上皮-间充质转化与肿瘤干细胞起源之间的联系。IL-6是一种介导炎症反应的主要因子，在肿瘤的病理生理学中起重要的作用。研究显示，在乳腺癌病人中，血清IL-6的升高水平与不良的疾病预后相关。最近的研究显示，IL-6是很强的上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)诱导因子，其能诱导上皮表型的乳腺癌细胞株向间充质表型转化;另一方面，最近报道EMT过程能在体外产生具有干细胞特性的CD44+CD24-/low标记的乳腺癌干细胞亚群[10，11]，而这群细胞具有高致瘤性，对传统化疗药物抵抗及高度的辐射抵抗能力。因此，我们推测IL-6有可能通过产生具有CD44+CD24-/low标记的乳腺癌干细胞从而介导了乳腺癌细胞的增殖、化疗抵抗及辐射抵抗。本研究利用MCF7乳腺癌细胞株模型，深入研究IL-6对诱导MCF7细胞EMT及CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞产生的作用，及对MCF7细胞增殖、阿霉素抵抗及辐射抵抗的影响，意在阐明IL-6促进乳腺癌生长、细胞辐射抵抗以及化疗抵抗的潜在机制。
　　目的:
　　(1)IL-6能否有效诱导乳腺癌MCF7细胞发生上皮-间充质转化;
　　(2)探讨诱导后的MCF7是否增加了CD44+CD24-/low标记乳腺癌干细胞的比例;
　　(3)分析经诱导后产生的CD44+CD24-/low细胞是否具有更强的增殖、辐射、化疗抵抗能力。
　　方法:
　　(1)利用含50ng/ml IL-6的培养基培养MCF7细胞;
　　(2)流式细胞术检测CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞含量的变化;
　　(3)real time-RT-PCR及westernbloting技术检测上皮-间充质转化标记分子的表达水平;
　　(4)流式细胞术从诱导组中分选出CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞群体;
　　(5)CCK8细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖及对阿霉素药物的敏感性;
　　(6)细胞凋亡检测试剂盒检测阿霉素对细胞凋亡的作用;
　　(7)克隆形成实验检测诱导后细胞的辐射抵抗能力。
　　结果:
　　(1)IL-6能诱导MCF7细胞发生上皮-间充质样转化
　　(2)诱导5天后CD44+CD24-/low细胞显著富集
　　(3)IL-6增加了MCF7细胞的增殖;
　　(4)IL-6提高了MCF7对阿霉素药物的耐药能力;
　　(5)诱导后细胞的辐射抵抗能力显著提高
　　结论:
　　IL-6通过诱导乳腺癌MCF7细胞发生EMT产生CD44+CD24-/low细胞从而促进了MCF7细胞的增殖，提高了对阿霉素药物抵抗及辐射抵抗的能力。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1．IL-6诱导MCF7细胞发生上皮间充质转化

2．IL-6诱导培养显著提高了CD44+CD24-／low细胞的比例

3．IL-6诱导促进乳腺癌MCF7细胞的增殖

4．IL-6提高乳腺癌MCF7细胞对阿霉素药物的抵抗

5．IL-6诱导后的MCF7细胞提高了辐射抵抗能力

讨论

结论

参考文献

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