摘要
第一章 前言
1.1 基因治疗
1.2 基因载体
1.2.1 病毒型基因载体
1.2.2 非病毒型基因载体
1.3 基于聚酰胺-胺(PAMAM)的基因传递载体
1.3.1 PAMAM的合成方法
1.3.2 PAMAM的化学修饰
1.4 基于聚乙烯亚胺(PEI)的基因传递载体
1.4.1 PEI的化学修饰
1.5 基因载体PEG修饰后的常见问题及策略
1.6 阳离子聚合物介导基因的传递机制
1.6.1 细胞摄取机制
1.6.2 内涵体/溶酶体逃逸机制
1.6.3 入核的机制
1.7 本研究目的、意义和内容
第二章 PAMAM-PEI(PAPE)聚合物的合成与表征
2.1 试剂和仪器
2.2 PAMAM的合成
2.2.1 PAMAM G-0.5的合成
2.2.2 PAMAM G0的合成
2.2.3 PAMAM G1.5和G2.5的合成
2.3 PAMAM-PEI(PAPE)的合成
2.3.1 PAPE的红外光谱分析
2.3.2 PAPE的1HNMR分析
2.3.3 PAPE的GPC分析
2.4 结果与讨论
2.4.1 PAMAM的合成
2.4.2 PAPE的合成
2.4.3 PAPE的红外表征
2.4.4 PAPE的1HNMR分析
2.4.5 PAPE的GPC分析
2.4.6 PAPE的结构分析
2.5 本章小结
第三章 PAPE/pDNA复合物的制备及物理性能
3.1 试剂和仪器
3.2 LB培养基的配制
3.3 质粒的转化
3.4 pEGFP-C1的大提
3.5 PAPE/pDNA复合物的制备
3.6 PAPE对pDNA的压缩能力和保护能力分析
3.7 PAPE/pDNA复合物的粒径,电位和形态的测定
3.8 统计学分析
3.9 结果与讨论
3.9.1 质粒的转化和提取
3.9.2 凝胶电泳分析PAPEs的基因压缩能力
3.9.3 PAPE/pDNA的抗核酸酶降解分析
3.9.4 PAPE/pDNA的粒径、电位和形态测定
3.10 本章小结
第四章 PAPE的基因转染活力及毒性评估
4.1 试剂,细胞和仪器
4.2 试验方法
4.2.1 细胞培养
4.2.2 体外转染
4.2.3 细胞毒性评估
4.3 统计学分析
4.4 结果与讨论
4.4.1 聚合物PAPE的体外转染
4.4.2 PAPE及其基因复合物的毒性评估
4.5 本章小结
第五章 PAPE/pDNA复合物的转染机理初探
5.1 试剂和仪器
5.2 试验方法
5.2.1 荧光素标记的DNA制备
5.2.2 PAPE/pDNA复合物的摄取途径
5.2.3 PAPE/pDNA复合物经CvME摄取的基因表达动力学
5.2.4 PAPE/pDNA复合物的胞内运输
5.2.5 氯喹和aphidicolin对转染的影响
5.3 统计学处理
5.4 结果与讨论
5.4.1 质粒DNA的荧光素标记
5.4.2 PAPE/pDNA复合物的摄取途径
5.4.3 PAPE/pDNA的基因表达动力学
5.4.4 PAPE/pDNA复合物的胞内过程
5.4.5 氯喹与aphidicolin对PAPE/pDNA复合物转染效率的影响
5.5 本章小结
第六章 PME的合成、表征及生物学性能评价
6.1 试剂、仪器及细胞
6.2 试验方法
6.2.1 PAMAM G2.5-PEI 423共聚物(PME)的合成
6.2.2 PME的结构分析
6.2.3 细胞培养
6.2.4 转染
6.2.5 细胞毒性评估
6.3 统计学分析
6.4 结果与讨论
6.4.1 PME的合成与表征
6.4.2 聚合物PME转染HEK 293T细胞
6.4.3 聚合物PME/pDNA在最优比转染多种细胞系
6.4.4 聚合物PME的细胞毒性
6.5 本章小结
第七章 PME-PEG-FA共聚物的合成、表征及其生物相容性评估
7.1 试剂和仪器
7.2 试验方法
7.2.1 COOH-PEG3.4k-FA1和COOH-PEG3.4k-FA2的合成
7.2.2 PME-PEG3.4k-FA1,PME-PEG3.5k,PME-PEG3.4k-FA2的合成
7.2.3 聚合物的表征
7.2.4 细胞毒性
7.2.5 溶血分析
7.3 计学分析
7.4 结果与讨论
7.4.1 COOH-PEG3.4k-FA1和COOH-PEG3.4k-FA2的合成及表征
7.4.2 PME-PEG3.4k-FA2,PME-PEG3.4k-FA1,PME-PEG的合成及表征
7.4.3 聚合物及其基因复合物的细胞毒性和复合物的溶血分析
7.5 本章小结
第八章 聚合物/pDNA复合物的物理性能及体外转染研究
8.1 试剂和仪器
8.2 试验方法
8.2.1 琼脂糖凝胶阻滞实验
8.2.2 PME-(PEG3.4k-FA2)1.72/pDNA复合物的粒径和电位测量
8.2.3 体外转染
8.3 统计学分析
8.4 结果与讨论
8.4.1 压缩能力分析
8.4.2 粒径、电位测定
8.4.3 聚合物的体外转染
8.5 本章小结
第九章 PME-(PEG3.4k-FA2)1.72/pDNA复合物的细胞摄取
9.1 试剂和仪器
9.2 2D细胞摄取
9.3 3D多细胞球体的摄取
9.4 统计学分析
9.5 结果与讨论
9.5.1 2D细胞摄取分析
9.5.2 3D细胞摄取分析
9.6 本章小结
第十章 PME-(PEG3.4k-FA2)1.72/pDNA复合物的细胞摄取机制
10.1 试剂和仪器
10.2 叶酸竞争性试验和摄取途径
10.3 统计学分析
10.4 结果与讨论
10.4.1 载体的细胞特异性和摄取途径分析
10.5 本章小结
参考文献
全文总结与创新点
中英文缩写词表
致谢
攻读博士期间论文成果
声明
统计学审稿证明