戊酸雌二醇调节ER-α及TGF-β1、MMP9在预防及治疗大鼠宫腔粘连中的作用探讨

摘要

宫腔粘连（intrauterine adhesions，IUA）是指各种原因的创伤，如刮宫、感染、电灼等导致子宫内膜基底层损伤，子宫壁瘢痕愈合，使宫腔和（或）宫颈管腔闭锁，子宫失去原有生理功能的一种疾病。该病最早于1894年报道，1948年Asherman首次系统的报道了流产和产后刮宫导致的宫腔粘连病例，并将该病命名为“损伤性闭经(traumatical amenorrhea)”。IUA的症状主要有闭经、痛经、不孕，即使通过治疗后成功自然妊娠，患者于孕期也容易发生流产、早产、胎盘粘连、产后出血、胎儿宫内发育迟缓、胎儿畸形等严重的产科并发症，给患者带来经济及心理负担的同时，也给医务工作者带来了严峻的考验。IUA的发病原因多为人工流产、早孕及中晚孕期清宫术、宫腔镜手术等造成。IUA的发病机制尚不清楚，研究假说众多，如纤维化增生过度学说、神经反射学说、子宫内膜干细胞分化异常等，研究最为广泛的当属纤维化增生过度学说。IUA的病理学改变包括子宫内膜组织纤维化、子宫内膜腺体减少，这与纤维化性疾病相同，把IUA视为纤维化性疾病研究也是IUA治疗的重要突破口。IUA的诊断方法主要依靠宫腔镜检查，在直视下能全面评估官腔形态、子宫内膜分布及损伤程度，是诊断IUA的准确方法及首选方法。其他的诊断方法，如子宫输卵管碘油造影、超声及MRI检查的益处不明显。
　　戊酸雌二醇(estradiol valerate，E2V)是目前宫腔粘连分离术后应用雌激素最常用的雌激素制剂，它是天然雌激素17β-雌二醇的合成酯，20世纪50年代，E2V就已投入临床应用，目前已成为临床上最常用的雌二醇制剂。E2V主要应用于治疗雌激素低下性疾病、月经紊乱以及子宫内膜损伤性疾病，如卵巢早衰、围绝经期综合征、月经不调及IUA等。本研究就是应用E2V作为治疗IUA的辅助治疗药物，观察其治疗效果。雌激素受体(estrogen receptors，ERs)是一组广泛表达于细胞内外的蛋白质，它可以特异性的结合雌激素，使其被激活并转移至细胞核内，作用于相应的DNA片段，发挥生物学效应。也有最新研究证实ERs可以不通过与DNA结合而独立发挥生物学效应。ERs可以分为两种类型:核雌激素受体（属于细胞核内受体家族）和膜雌激素受体（属于G蛋白偶联受体家族）。核雌激素受体又分为ER-α和ER-β，转化生长因子-β(TGF-β)是一种多效能细胞生长因子，它发挥生物学作用前的信息转导主要通过Smad蛋白家族完成。基质金属蛋白酶类(MMPs)家族是一组需要金属元素来催化的蛋白酶，分布广泛，可由众多细胞以非活性状态合成，由胞外蛋白酶裂解激活后，对细胞外基质成分如胶原蛋白Ⅳ、Ⅴ发挥降解作用，减少细胞外基质的堆积。因此MMPs的生理作用与TGF-β相反，是一种分解细胞外基质的蛋白酶，可以降解已形成的纤维化组织。
　　目的：
　　本研究采用机械和感染双重损伤法构建SD大鼠IUA动物模型，再予以不同剂量的E2V在不同时期应用于IUA大鼠模型，通过检测血清E2浓度、观察子宫内膜纤维化面积比、子宫内膜腺体计数、子宫内膜TGF-β1、 MMP-9及ER-α的表达等一系列变化，评估雌激素对IUA的预防及治疗效果，以期更进一步的指导临床试验及临床应用。
　　方法：
　　1.实验分组；
　　2.构建大鼠宫腔粘连模型；
　　3.雌激素的剂量换算；
　　4.实验流程。
　　结果：
　　1.各组大鼠血清雌二醇(E2)浓度结果
　　(1) IUA造模前各组大鼠血清E2浓度比较
　　于IUA造模前剪尾采血测定每组大鼠血清E2浓度，结果显示:比较8组大鼠血清E2浓度无显著性差异(F=0.752，P=0.643)，说明造模前各组大鼠内分泌状况相近。
　　(2)各组大鼠第二次采血血清E2浓度与第一次采血自身浓度比较
　　空白对照组和实验对照组未予灌胃，24d后再次测定血清E2浓度与造模前比较无显著性差异（P空白对照组=0.295，P实验对照组=0.952）;3个雌激素A组于造模当天开始连续灌胃E2V24d后，测定各组大鼠血清E2浓度，与造模前自身的浓度比较均显著升高(P＜0.05），各组P值在P=0.002～0.000间，差异明显;3个雌激素B组造模后第9d开始灌胃雌激素，同样持续24d，抽血测定各组大鼠血清E2浓度，与造模前自身的浓度比较亦均显著升高(P＜0.05)，各组P值在P=0.002～0.000间，差异亦明显。
　　(3)各组大鼠第二次采血血清E2浓度组间分别比较
　　空白对照组与实验对照组比较，血清E2浓度无显著性差异(P=0.240);6个雌激素组分别与2个对照组比较，血清E2浓度显著升高，均有显著性差异(P＜0.05)，P值均为0.000。3个雌激素A组间分别比较，随着灌胃E2V剂量的增加，血清E2浓度亦增加，结果具有显著性差异(P＜0.05)，中雌A组高于低雌A组，高雌A组高于中雌A组及低雌A组（P值均为0.000）。3个雌激素B组间分别比较，随着灌胃E2V剂量的增加，血清E2浓度亦增加，结果亦有显著性差异(P＜0.05），中雌B组高于低雌B组，高雌B组高于中雌B组及低雌B组（P值均为0.000）。灌胃相同剂量E2V的各组大鼠组间比较，低雌A组与低雌B组比较、中雌A组与中雌B组比较、高雌A组与高雌B组比较均无显著性差异，P值分别为P=0.656、P=0.189、P=0.721。
　　(4)各组大鼠血清E2检测结果总结
　　灌胃E2V后各组大鼠血清E2浓度的结果比较显示，各组大鼠血清E2浓度与雌激素灌胃剂量呈正相关关系。
　　2.各组大鼠子宫内膜纤维化面积比结果；
　　3.各组大鼠子宫内膜腺体计数结果；
　　4.各组大鼠子宫内膜TGF-β1表达结果；
　　5.各组大鼠子宫内膜MMP9表达结果；
　　6.各组大鼠子宫内膜ER-α表达结果。
　　结论：
　　1.3个雌激素A组经E2治疗后纤维化面积比较实验对照组降低，腺体计数相对增多，考虑是否与在宫腔创伤初期IUA尚未完全形成时就开始服用雌激素，对大鼠IUA具有一定的预防作用有关;3个雌激素B组纤维化面积和腺体计数均无明显改善，可能与宫腔创伤后期、粘连程度加重、应用雌激素的时间拖后，治疗效果欠佳有关，考虑在这个阶段不能单一应用雌激素治疗IUA，如能结合TCRA、宫内隔膜、干细胞等综合性治疗应该会增加疗效。
　　2.雌激素组中，中、高剂量组的TGF-β1表达水平较低剂量组降低，MMP9表达水平则升高，而中、高组间比较无差异，说明TCRA术后应用中剂量雌激素是最低的有效剂量。
　　3.中、高剂量雌激素组的ER-α表达水平较低剂量雌激素组高，说明雌激素可以诱导ER-α的合成，而中、高剂量组间无差异，说明ER-α的合成并不完全与雌激素剂量相关，需要进一步的基础研究探讨ER-α的表达机制。

目录

摘要

前言

实验方法

1．实验动物及材料

2．实验分组

3．构建大鼠宫腔粘连模型

4．雌激素的剂量换算

5．各种检测指标和实验方法

实验结果

1．各组大鼠血清E2浓度

2．各组大鼠子宫内膜纤维化面积比结果

3．各组大鼠子宫内膜腺体计数结果

4．各组大鼠子宫内膜TGF-β1表达结果

5．各组大鼠子宫内膜MMP9表达结果

6．各组大鼠子宫内膜ER-α表达结果

讨论

1．宫腔粘连的研究现状

2．E2V调节TGF-β1参与IUA的病理发展过程

3．E2V调节MMP9参与IUA的降解过程

4．E2V调节ER-α的表达参与IUA的降解过程

结论

参考文献

攻读学位期间成果

致谢

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