短暂性脑缺血发作患者血清microRNA的水平变化及其临床意义

摘要

短暂性脑缺血性发作(transient ischemic attacks，TIA)是指由多种原因引发局灶性脑缺血，进而导致的突发性、短暂性、可逆性神经功能障碍。TIA易反复发作，既往有一过性TIA病史的患者再次发生脑卒中的风险明显增加，致残率、病死率更高。血清微小核糖核酸(microRNAs，miRNAs)是近年来的研究热点，与缺血性脑血管疾病的发生、发展密切相关，但有关TIA患者血清miRNAs表达水平及其变化尚缺乏系统性的研究，血清miRNAs对TIA预测及TIA后再发卒中风险评估的临床价值仍有待进一步研究探讨。
　　目的:
　　通过分析TIA患者血清miRNAs水平变化，筛选TIA患者血清特异变化的miRNAs，比较并探讨血清miRNAs及现有脑损伤相关血清学标志物，对TIA预测及TIA后再发卒中风险评估的临床价值，以期为临床TIA患者的病情评估与监测提供新的途径与理论依据。
　　方法:
　　选取126例TIA患者和44例对照者，依据TIA患者再发卒中风险评估体系ABCD3-I评分，将其分为低危（0～3分，46例）、中危(4～7分，45例)、高危(8～13分，35例)三组。采用实时荧光定量PCR(quantitative reverse-transcriptionPCR，qRT-PCR)技术，检测候选的13种与缺血性脑血管疾病相关的miRNAs，在TIA患者和对照者血清中的相对表达水平（包括miR-15b、miR-30a、miR-21、miR-29b、miR-181a、miR-124、miR-335、miR-146a、miR-499、miR-144、miR-208b、miR-215和miR-23b），以筛选TIA患者血清特异变化的miRNAs。同时，检测TIA患者脑损伤相关血清学标志物的水平，包括血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)、氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron-Specific Enolase，NSE)和脑源性神经营养因子(Brain DerivedNeurotrophic Factor，BDNF)。采用Spearman相关性分析，探讨血清miRNAs和脑损伤相关血清学标志物之间的相关性。采用受试者工作曲线(receiveroperating characteristic curves，ROC)分析和多元Logistic回归分析，比较并探讨血清miRNAs及脑损伤相关血清学标志物应用于TIA预测及TIA后再发卒中风险评估的临床价值。
　　结果:
　　一、qRT-PCR结果显示，TIA患者组血清miR-23b-3p、miR-208b、miR-215、miR-181a-5p水平较对照组均显著升高(P均＜0.05); TIA患者中，高危组、中危组、低危组的血清miR-23b-3p、miR-208b、miR-215、miR-181a-5p水平也较对照组均显著升高(P均＜0.05）。相关性分析显示，上述四种miRNAs水平两两之间均呈显著正相关(P均＜0.05）。
　　二、TIA患者组血清Lp-PLA2、ox-LDL及NSE水平较对照组均显著升高(P均＜0.05); TIA患者中，仅高危组患者血清Lp-PLA2、ox-LDL及NSE水平较对照组显著升高(P均＜0.05）。相关性分析显示，血清Lp-PLA2与ox-LDL水平呈显著正相关(r=0.264，P=0.002)、NSE与BDNF水平呈显著正相关(r=0.197，P=0.041)。
　　三、ROC曲线分析结果显示，血清miR-23b-3p、miR-208b、miR-215和miR-181a-5p区分TIA患者与对照者的曲线下面积(area under the curve，AUC)分别为0.784、0.795、0.768和0.779(P均＜0.01)，四种miRNAs的组合区分TIA患者与对照者的AUC为0.812(P=0.001);血清Lp-PLA2和NSE区分TIA患者的AUC分别为0.725和0.743(P均＜0.05)，两指标的组合区分TIA患者与对照者的AUC为0.817(P=0.001);四种miRNAs联合Lp-PLA2和NSE的组合区分TIA患者与对照者的AUC为0.925(P＜0.001)。
　　四、以TIA患者不同危险分层组及对照组作为独立的四分类变量，以对照组作为参照类别，分别对血清miRNAs和脑损伤相关指标进行多元Logistic回归分析。单因素Logistic回归分析结果显示，血清高miR-23b-3p、miR-208b、miR-215水平均与TIA患者发生卒中的各层风险相关;血清高Lp-PLA2、ox-LDL、NSE及BDNF水平均与TIA患者发生卒中的高风险相关，高NSE水平还与TIA患者发生卒中的中、低风险相关。多因素Logistic回归分析结果显示，在调整年龄、性别、血压和血脂参数的影响后，血清miR-23b-3p水平的升高仍与TIA患者发生卒中的高、中风险密切相关，miR-208b水平的升高仍与TIA患者发生卒中的高风险密切相关;血清Lp-PLA2、ox-LDL及NSE水平的升高仍与TIA患者发生卒中的高风险密切相关，Lp-PLA2、NSE水平的升高仍与TIA患者发生卒中的中、低风险密切相关。
　　结论:
　　TIA患者血清miR-23b-3p、miR-181a-5p、miR-208b及miR-215水平显著增加，上述miRNAs有望成为TIA预测及TIA后卒中风险评估的新型生物标志物，为临床TIA患者的病情评估与监测提供新的途径与理论依据。

目录

摘要

第一章 绪论

一、短暂性脑缺血发作及其现有病情评估方法

1．1 短暂性脑缺血发作

1．2 ABCD评分系统

1．3 脑损伤相关血清学标志物

二、微小核糖核酸

2．1 微小核糖核酸的简介

2．2 miRNAs的作用机制

2．3 miRNAs的研究方法

三、miRNAs与缺血性脑血管疾病

3．1 与氧化应激相关miRNAs

3．2 与凋亡相关miRNAs

3．3 细胞缺血缺氧模型的相关研究

3．4 大脑中动脉堵塞动物模型的相关研究

3．5 缺血性脑血管疾病患者循环miRNAs的临床研究

第二章 短暂性脑缺血发作患者血清microRNA的水平变化及其临床意义

一、引言

二、实验材料与方法

2．1 研究对象与标本收集

2．2 血清miRNAs的筛选

2．3 仪器与试剂

2．4 血清RNA的提取

2．5 RT-PCR及qRT-PCR体系试剂配制

2．6 miRNAs含量检测

2．7 血清Lp-PLA2的检测

2．8 血清ox-LDL的检测

2．9 血清NSE的检测

2．10 血清BDNF的检测

2．11 常规生化指标的检测

2．12 统计学分析

三、实验结果

3．1 TIA患者及对照者的临床基本信息及血清生化指标的水平

3．2 TIA患者血清miRNAs水平

3．3 TIA患者血清miRNAs的ROC曲线分析

3．4 TIA患者血清脑损伤相关指标的水平

3．5 TIA患者血清脑损伤相关指标的ROC曲线分析

3．6 TIA患者血清miRNAs与脑损伤相关指标的相关性分析

3．7 TIA患者血清miRNAs与卒中发生风险相关性的Logistic回归分析

3．8 TIA患者血清脑损伤相关指标与卒中发生风险相关性的Logistic回归分析

四、讨论

全文小结

第三章 儿童肾病综合征患者血清游离脂肪酸与白蛋白比值的变化及其临床意义

参考文献

主要英文缩略词表

综述

成果

致谢

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