microRNA-34a和microRNA-101在肺癌患者血清中的表达及可能的临床意义

摘要

目的：　　microRNA(miRNA)是在真核微生物中发现的一类内生的、长度约为21-22个核苷酸的RNA，其在细胞内具有多种重要的调节功能。miRNA可以成为抗癌基因来抑制癌基因，也可以成为癌基因来抑制抗癌基因，miRNA的异常会影响到其靶基因的突变，从而可能导致恶性肿瘤的发生；反之，利用miRNA也可能对恶性肿瘤的诊断和治疗起到关键性作用。所以对miRNA分子机制的研究已成为恶性肿瘤诊断及治疗的新热点。miRNA可稳定存在于血浆和血清中，并可作为肿瘤或其他疾病潜在的生物标志物。本研究的目的在于探寻肺癌患者血清中microRNA-34a（miR-34a）和microRNA-101（miR-101）的表达水平，探讨miR-34a和miR-101的表达特征，及其与癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen，CEA）水平的相关性，与肺癌诊断、发病机制的关系。　　方法：　　收集111例肺癌患者和101例正常人血清标本，提取血清中的小片段RNA，通过miR-34a和miR-101特异性的反转录引物进行RT-PCR，并通过Real-time PCR法检测两组血清中miR-34a和miR-101的表达水平，验证肺癌患者血清中miR-34a和miR-101的异常表达。然后筛选出吸烟患者组，不吸烟患者组，通过Real-time PCR法检测两组血清中miR-34a和miR-101的表达水平，对两组间的miR-34a和miR-101的表达进行统计学分析，以探寻miRNA与肺癌发病机制的相关性。再选出一组肺癌患者同时使用Real-time PCR法检测血清中miR-34a和miR-101的表达水平；使用Access CEA双位点夹心法（Sandwich）酶免疫分析方法检测CEA水平，并对miRNA和CEA进行相关性分析。　　结果：　　1.miR-34a和miR-101在肺癌患者血清中表达上调，与正常对照组比较，miR-34a和miR-101的表达水平均显著升高（P<0.05），具有统计学意义。2.吸烟患者组与不吸烟患者组间的miR-34a的表达水平差异不明显（P>0.05），不具有统计学意义；miR-101表达水平差异明显（P<0.05），具有统计学意义。3.miR-34a与CEA水平为正相关(r2=0.69，P=0.036)；miR-101的表达水平与CEA水平为正相关(r2=0.76，P=0.023)。　　结论：　　1.通过Real-time PCR技术检测miR-34a和miR-101在肺癌患者血清中表达均上调，进一步分析得出，与正常对照组相比，miR-34a和miR-101在肺癌患者血清中呈现异常高表达，可能与肺癌的发生密切相关。　　2.通过Real-time PCR技术检测确定，miR-34a在吸烟肺癌组和不吸烟肺癌组间血清中表达水平均上调，但组间的表达水平无显著差异。这与以往研究资料中显示的miR-34a在多种恶性肿瘤患者血清中显著上调基本相同；miR-101在吸烟肺癌组和不吸烟肺癌组间血清中的表达水平上调，但组间差异显著，具有统计学意义。表明不同的诱因可能影响不同miRNA，最终相关基因突变，而导致同种类型的癌变。所以肺癌可能存在不同的发生发展的分子机制。　　3.在肺癌患者血清中 miR-34a和miR-101表达水平均与CEA呈正相关，所以miR-34a，miR-101与CEA联合检测肺癌将具更好的诊断价值。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、肺癌患者血清中miRNA的筛选

1.1对象和方法

1.1.1研究对象

1.1.2实验材料

1.1.3实验方法

1.2结果

1.2.1肺癌患者组和正常对照组的性别、年龄比较

1.2.2 采用Real-time PCR 方法检测样品中的miRNA的表达水平

1.3讨论

1.4小结

二、miR-34a/101表达与吸烟的相关性及与CEA的相关性

2.1材料和方法

2.1.1实验材料

2.1.2 CEA检测的实验方法

2.2结果

2.2.1. 两种miRNA 在吸烟肺癌患者组，不吸烟肺癌患者组间的表达结果

2.2.2. 肺癌患者组血清中miR-34a、miR-101 表达水平与CEA 表达相关性分析结果

2.3讨论

2.3.1 microRNA与肺癌的发病机理,

2.3.2两种miRNA与CEA在肺癌患者组血清中的表达正相关

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:miRNA在肺癌中的研究进展

致谢