氧化应激标志物AOPPs对妊娠期SD大鼠肝脏代谢及胎盘功能影响研究

摘要

氧化应激(Oxidative Stress)的定义是指ROS(Reactive OxygenSpecies)等自由基的产生与抗氧化能力之间的平衡失调。由于ROS的产生，会造成体内各器官组织的损伤，这时机体会启动复杂的抗氧化防御机制以保护体内组织。作为一种新型的ROS氧化应激标志物——晚期氧化蛋白产物(AdvancedOxidation Protein Products，简称AOPPs)，在慢性肾脏病、糖尿病、动脉粥样硬化，自身免疫疾病、神经退行病变、肿瘤等多种疾病中存在，并在病理生理机制中发挥重要作用。而在对妊娠相关疾病研究方面，主要集中在流行病学研究，或者以细胞为体外模型研究个别氧化还原依赖性信号通路等方面，既往研究缺乏系统性的分析AOPPs在体内对妊娠期相关疾病的致病机理。
　　研究目的:研究AOPPs对肝脏及胎盘功能影响，探讨AOPPs与妊娠相关疾病关系。
　　研究方法:构造AOPPs处理妊娠中晚期SD大鼠模型，选取肝脏以及胎盘为研究对象，进行HE染色对比组织病理学改变，并利用高通量测序技术对肝脏及胎盘组织进行转录组测序，对测序结果差异表达基因进行功能富集分析，从而推测AOPPs对妊娠期个体的生物学功能影响及相关信号转导通路。同时进行RT-qPCR对差异表达基因进行验证。
　　研究结果:组织病理学方面，光镜下可见AOPPs处理组肝脏较对照组及BSA组肝细胞间隙增宽，肝索间距增大，并未见明显肝细胞形态改变，无淋巴细胞聚集、明显胆汁淤积、胆栓形成等的特异性肝内胆汁酸淤积症病理学改变。而胎盘组织中，AOPPs处理组与对照组及BSA组相比，中性粒细胞聚集增加，密度增大，其余未见明显差异改变，怀疑AOPPs组胎盘呈绒毛膜羊膜炎病理改变。肝脏高通量测序结果中，以BSA组为参考，AOPPs组上调表达差异基因为46个，下调表达86个。肝脏差异表达基因的KEGG信号通路富集在胆汁酸分泌等通路上，AOPPs处理组中ABCG5及KCNN2(SK2)两基因下调，提示AOPPs处理对妊娠期SD大鼠可能造成肝内胆汁酸排泄异常，导致肝细胞内胆汁酸淤积。在胎盘高通量测序结果中，以BSA组为参考，AOPPs组差异表达基因上调表达52个，下调表达68个。胎盘差异表达基因的KEGG信号通路富集在核糖体等通路上，AOPPs处理妊娠期SD大鼠胎盘组织测序结果显示差异表达基因S17e与基因L31e下调表达，影响核糖体蛋白大亚单位中核糖体蛋白L31及小亚单位核糖体蛋白S17的合成。RT-qPCR实验结果证实高通量测序及生物信息学分析的可靠性。
　　研究结论:AOPPs在妊娠期肝内胆汁酸淤积症的发病机制中起到一定作用。AOPPs影响胎盘核糖体蛋白大亚单位中核糖体蛋白L31及小亚单位核糖体蛋白S17的合成，进而损伤核糖体的正常生物学功能，引发一系列病理机制的启动。

目录

摘要

前言

第一章 氧化应激标志物AOPPs对妊娠期SD大鼠肝脏和胎盘的组织病理学影响

一、材料与方法

1．实验材料、试剂和主要设备

2．实验方法

二、实验结果

1．AOPPs处理对妊娠期SD大鼠肝脏组织病理学改变

2．AOPPs处理对妊娠期SD大鼠胎盘组织病理学改变

三、讨论

第二章 AOPPs处理对妊娠期SD大鼠的肝脏组织基因表达影响

1．实验材料、试剂和主要设备

2．实验方法

二、实验结果

1．总RNA的纯度、含量与完整性

2．AOPPs处理妊娠期SD大鼠肝脏组织mRNA高通量测序结果

3．荧光实时定量PCR验证结果

三、讨论

第三章 AOPPs处理对妊娠期SD大鼠的胎盘组织基因表达影响

一、材料与方法

1．实验材料、试剂和主要设备

2．实验方法

二、实验结果

1．总RNA的纯度、含量与完整性

2．AOPPs处理对妊娠期SD大鼠胎盘组织mRNA高通量测序结果

三、讨论

全文总结

参考文献

成果

致谢

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