pH响应5-氨基乙酰丙酸纳米氧化铁体系的制备及对胃肠癌转移淋巴结示踪作用的研究

摘要

淋巴结转移是胃肠癌最主要的转移方式之一，因目前转移淋巴结示踪技术的局限性，难以在术中精准清扫。本研究拟开发一种术中可视化胃肠癌转移淋巴结示踪体系。前期工作中我们已首创制备纳米载体葡聚糖氧化铁(Dex-SPIO)，此纳米分散体系具有高度嗜淋巴性，具有良好的淋巴结黑染效果，但仍无法鉴别癌转移淋巴结。因此在此研究中，我们将其与肿瘤荧光特异性智能响应前药葡聚糖-5-氨基乙酰丙酸衍生物（Dex-5ALA）通过共沉淀法及超声分散技术结合，成功制备pH响应荧光特异性纳米氧化铁杂化体系示踪剂：5-氨基乙酰丙酸-葡聚糖-氧化铁(5ALA-Dex-SPIO)，其兼具以下优点：(1)操作简单方便，生物安全性良好。体系呈黑褐色液态，可术中经黏膜或浆膜下局部注射于肿瘤周围，无局部炎症反应，术后代谢快无局部药物残留;(2)高度嗜淋巴性。粒径130～170nm，可特异性富集于淋巴结，实现淋巴结黑染可视;(3)肿瘤细胞特异性。pH敏感键负载ALA，在肿瘤局部弱酸环境释放ALA，诱导癌细胞内自体荧光物质-原卟啉(PpIX)大量积聚，增强癌转移淋巴结荧光强度，精准区分癌转移淋巴结和正常淋巴结。最终，课题组希望建立基于5ALA-Dex-SPIO荧光成像和荧光定量分析的癌转移淋巴结诊断模型，并自主研发针对5ALA-Dex-SPIO示踪的便携式腹腔镜荧光检测系统，为精确手术清扫范围提供新思路。
　　目的：本研究的目的在于研制一种癌转移淋巴结示踪剂5ALA-Dex-SPIO，评价其理化性质，证实其示踪癌转移淋巴结的有效性;探寻其体外诱导胃肠癌细胞内原卟啉聚积的药代动力学变化规律，并评价其体内外的生物安全性。
　　方法：以葡聚糖为原料，与ALA通过pH敏感健偶联，制备出具有pH响应特性的Dex-ALA大分子前药，再以氯化铁和氯化亚铁(SPIO)为铁源，通过化学共沉淀法，制备5ALA-Dex-SPIO;再将5ALA-Dex-SPIO与人正常胃黏膜细胞（GES-1）、人正常结直肠粘膜细胞(FHC)、人淋巴管内皮细胞(LECs)、人胃癌细胞（SGC-7901）、人结肠癌细胞(SW480)共培养，评估其对细胞自体荧光的影响及体外生物安全性;建立裸鼠胃肠癌细胞腋周转移淋巴结模型，并将5ALA-Dex-SPIO局部注射于肿瘤周围评价其示踪癌转移淋巴结的效果及体内生物安全性。
　　结果：本研究制备的5ALA-Dex-SPIO，粒径尺寸为160nm左右，分散液颜色为黑褐色;体内外实验表明，浓度为60mg/mL的样品在2～6小时内对癌淋巴结可视化示踪效果良好，且生物安全性可靠。
　　结论：5ALA-Dex-SPIO理化性质稳定，可有效示踪癌转移淋巴结，且局部注射安全性好;为建立癌转移淋巴结诊断模型，实现术中实时诊断癌转移淋巴结奠定基础。

目录

摘要

前言

一、材料与方法

2．5ALA-Dex-SPIO的制备

3．5ALA-Dex-SPIO的化学性质表征

4．5ALA-Dex-SPIO对细胞自体荧光的影响及体外生物安全性评估

5．5ALA-Dex-SPIO示踪癌转移淋巴结效果评估

6．5ALA-Dex-SPIO在体内生物安全性研究

7．统计学分析

2．5ALA-Dex-SPIO对细胞自体荧光的影响

3．5ALA-Dex-SPIO示踪癌转移淋巴结效果评估

4．5ALA-Dex-SPIO的生物安全性研究

三、讨论

四、结论

参考文献

六、英文缩写注解

七、攻读硕士学位期间研究成果

致谢

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