胎儿先天性肺囊腺瘤的产前遗传学诊断及宫内治疗的研究

摘要

目的：1.了解广佛地区胎儿先天性肺囊腺瘤(CCAM)的发病情况、妊娠结局、产后随访情况，探讨影响妊娠结局的相关因素。
　　2.了解中国已报道地区胎儿先天性肺囊腺瘤的发病率及特点。
　　3.探讨全基因组高分辨率染色体微阵列技术(chromosome microarray analysis，CMA)在胎儿先天性肺囊腺瘤中的应用价值。
　　4.评价母体激素给药治疗胎儿先天性肺囊腺瘤的效果并探讨其影响因素。
　　5.探讨开放式胎儿宫内手术及产时子宫外手术治疗胎儿先天性肺囊腺瘤的效果。
　　方法：1.收集2009.07至2017.03广佛地区6家医院产前超声诊断为CCAM的胎儿资料，通过各医院内部临床信息登记系统获得临床资料，以电话随访的方式了解妊娠结局，进行新生儿随访。运用卡方检验分析CCAM发病率及妊娠结局的变化趋势，运用多元Logistic回归分析CCAM患儿妊娠结局的影响因素。
　　2.选择文献报道的中国各地区的五项研究对393496个胎儿进行meta分析，分析中国CCAM的发病率及特点。
　　3.收集2009.07至2017.03在广州市妇女儿童医疗中心产前诊断中心就诊并接受侵入性产前诊断的先天性肺囊瘤胎儿病例(n=57)。全部病例均进行QF-PCR和染色体核型分析。对QF-PCR及染色体核型分析结果正常的胎儿样本，使用Qiagen DNA提取试剂盒提取基因组DNA，并采用NanoDrop分光光度计测量所测DNA的纯度和浓度，DNA样本合格后进入CMA分析(n=44)。根据美国Affymetrix公司提供的CytoScan HD芯片平台（包含195万拷贝数探针和75万单核苷酸多态性探针）的标准实验操作流程对样本DNA进行消化、连接、扩增、片段化、标记荧光信号、杂交、洗涤、染色以及芯片扫描。并使用配套的CHAS软件对扫描后芯片生成的文件进行转换和数据分析。参照本实验室的内部数据库、查阅相关国际公共数据库，如DGV、DECIPHER、OMIM、ISCA及UCSC在线数据库和同行实验室数据库等方法对CMA检测结果进行比对分析，判断CNVs的性质。
　　4.对文献报道的7项研究应用母体类固醇激素治疗CCAM的病例(n=52)进行Meta分析，提取个体患者数据，随机效应模型评估母体类固醇激素治疗后胎儿手术率，生存率和水肿消散率。单因素Logistic分析研究不同结局和变量之间的关联。
　　5.对2011年-2017年佛山市妇幼保健院22例CCAM患者的治疗情况进行回顾分析。
　　结果：1.广佛地区6家医院8年期间就诊的孕产妇共约32万例，产前超声诊断CCAM共108例，发病率为3.4/10000。男女发病率无显著差异，左侧肺叶多见，部分病例孕晚期CCAM有自发减小的趋势。孕产妇的居住地、不良生育史及胎儿是否合并胸腹水等特殊情况是妊娠结局的影响因素。
　　2.从文献荟萃分析得知，中国CCAM胎儿的患病率范围从1.14/10000至16.09/10000，平均患病率为4.01/10000。CCAM患病率在中国北部(7.93/10000)和中部(8.93/10000)地区较高，南部(2.81/10000)较低。
　　3.在接受CMA分析的44例胎儿CCAM病例中，7例在产后诊断为隔离肺，排除诊断后实际为37例CCAM样本，3例胎儿检出致病性CNVs，致病性CNVs检出率为8.1％(3/37)。检出的3例致病性CNVs对应的微缺失和微重复综合征分别为HNPP综合征、RCAD综合征和CMT1A综合征。此外，有23个CNVs片段共同存在于2个以上的样本中，其中3个共同片段包含致病基因，为VOUS片段，推测6p25.3，7q34微缺失和Xp22.33微重复与CCAM相关。DUSP22，PRSS1，SHOX可能是CCAM的候选基因。4例样本均检测到7q34(142266306-142493)片段缺失，包含OMIM基因PRSS1。
　　4.合并水肿的胎儿，母体激素治疗后水肿消退率、胎儿手术率和胎儿存活率分别为68.6％、11.5％、79.5％，微囊型比大囊型CCAM胎儿存活率和水肿消退率显著增高，接受多疗程类固醇治疗的胎儿比接受单疗程治疗的胎儿存活率低。
　　5.22例CCAM中，4例行开放式胎儿手术，7例行产时子宫外手术，除2例因早产胎儿肺发育不良死亡外，其他均预后良好。
　　结论：1.广佛地区胎儿CCAM的发病率为3.4/10000。孕产妇居住地在城市、有不良生育史及CCAM患儿未合并其他异常等是CCAM患儿活产分娩的保护因素。
　　2.中国胎儿CCAM平均患病率为4.01/10000，患病率在中国北部和中部地区较高，南部较低。
　　3.染色体微阵列检测37例CCAM样本，3例CCAM胎儿中检出致病性CNVs，检出率为8.1％(3/37)，检出的综合征为：RCAD综合征，HNPP综合症，CMT1A综合症。4例样本均检测到7q34(142266306-142493)片段缺失，包含OMIM基因PRSS1，推测PRSS1基因缺失或突变，可能导致支气管上皮反复损伤，在支气管分支期和增殖期导致支气管闭锁实质性发育不良，从而导致肺囊腺瘤的发生。
　　4.母体激素治疗CCAM是有效的，对微囊型疗效更显著。对于治疗无效者，应积极采取手术治疗。
　　5.开放式胎儿手术伴随胎膜早破、胎儿丢失的风险，产时子宫外手术预后良好。

目录

摘要

前言

参考文献

(一)广佛部分地区的流行病调查

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

(二)中国已报道地区的流行病调查

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二章 CCAM的产前遗传学诊断

引言

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第三章 CCAM的宫内治疗

引言

参考文献

(一)母体类固醇激素治疗CCAM的Meta分析

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

(二)初部探讨CCAM的胎儿手术治疗

1 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

结论

中英文缩略词对照

攻读学位期间成果

致谢

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