利用液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染及感染性腹泻病原体的研究

目录

摘要

第一章前言

1．1儿童呼吸道感染和腹泻流行病学现状

1．2液相芯片研究现状

1．2．1液相芯片原理

1．2．2液相芯片国内外应用现况

1．2．3液相芯片优势

1．3本研究目的及其意义

第二章利用液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染病原体

2．1材料

2．1．1标本来源

2．1．2主要试剂

2．1．3主要仪器

2．1．4主要试剂的配制

2．2方法

2．2．1标本的采集

2．2．2咽拭子样本的预处理

2．2．3核酸的提取

2．2．4多重RT-PCR反应

2．2．5液相芯片微球分子杂交

2．2．6 Luminex XMAP液态悬浮芯片仪检测前较准

2．2．7分子杂交后xTAG(R)RVP检测

2．2．8荧光定量qPCR检测

2．2．9统计学分析

2．3结果

2．3．1 Luminex液相芯片检测呼吸道病毒检出情况

2．3．2荧光定量qPCR检测呼吸道病毒检出情况

2．3．3 Luminex液相芯片与qPCR检测结果比较

2．4讨论

第三章利用液相芯片技术检测儿童感染性腹泻病原体

3．1材料

3．1．1标本的来源

3．1．2主要试剂

3．1．3主要仪器

3．1．4主要试剂的配制

3．2方法

3．2．1标本的收集

3．2．2粪便标本的预处理

3．2．3核酸的提取

3．2．4多重RT-PCR反应

3．2．5液相芯片微球分子杂交反应

3．2．6 Luminex XMAP液态悬浮芯片仪检测前较准

3．2．8荧光定量qPCR检测

3．2．9统计学分析

3．3结果

3．3．1 Liminex液相芯片检测肠道病原体检出情况

3．3．2荧光定量Rt-PCR检测肠道病原体检出情况

3．3．3 Luminex液相芯片与qPCR检测结果比较

3．4讨论

第四章多重PCR产物的克隆、序列测定与分析

4．1材料

4．1．1主要试剂

4．1．2主要仪器

4．1．3主要试剂的配制

4．2方法

4．2．1多重PCR产物连接至pMD 19-T载体

4．2．2制备感受态细胞

4．2．3转化(热休克法)

4．2．4挑单克隆接种及扩大培养

4．2．5菌液PCR

4．2．6琼脂糖凝胶电泳验证并送测序

4．3结果

4．3．1 15例咽拭子以及13例粪便标本对应的多重PCR产物凝胶电泳

4．3．2菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳验证

4．3．3测序结果与BLAST分析

4．3．4三种方法检测结果的综合分析

4．4讨论

全文总结

参考文献

中英文缩略词对照表

攻读学位期间发表的学术论文和研究成果

致谢

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