一氧化氮和谷氨酸在内皮素-1诱导神经元凋亡中的作用

摘要

目的：证实内皮素(ET)-1(2X10-5M)诱导培养大鼠大脑皮层神经元凋亡的作用；该浓度ET-1有无刺激培养大鼠大脑皮层神经元释放内源性一氧化氮(NO)和谷氨酸的作用；了解NO、谷氨酸在该浓度ET-1诱导培养大鼠大脑皮层神经元凋亡中的作用和地位。
　　方法：神经元培养取自乳鼠大脑皮质细胞,培养5天后分用于实验。实验分四组：对照组(空白)、ET-1组(2X10-5M)、ET-1+L-NAME(左旋精氨酸甲酯,NO合成抑制剂,100mM)组和ET-1+APV组(谷氨酸受体拮抗剂,100μM),继续培养24小时。收集细胞用流式细胞仪定量检测凋亡率；收集培养上清液用硝酸还原酶法检测细胞上清液中的NO浓度,高压液相法检测谷氨酸浓度。统计学处理采用双侧t检验。
　　结果：ET-1(20nM)处理后24小时,培养大鼠大脑皮层神经元凋亡率显著高于对照组(P<0.001)。L-NAME和APV可分别明显阻断了ET-1诱导神经元凋亡的作用,与ET-1组比较,凋亡率降幅分别为40%(P<0.05)和80%(P<0.001)。其中APV阻断ET-1诱导神经元凋亡的作用较L-NAME更明显(P<0.001)。经ET-1处理后24h,神经元培养液中NO和谷氨酸浓度均较对照组显著高(P<0.001)。而L-NAME完全抑制了ET-1引起的培养液中NO的升高。
　　结论：ET-1(20nM)有诱导培养大鼠大脑神经元凋亡的作用；该作用与ET-1刺激培养大鼠大脑神经元(合成和)释放内源性谷氨酸和NO增加有关；NO合酶抑制剂、谷氨酸受体拮抗剂能显著减轻ET-1诱导的神经元凋亡率,谷氨酸受体拮抗剂的作用更明显。提示ET-1诱导培养大鼠大脑神经元凋亡通过NO和谷氨酸途径,其中谷氨酸更为重要。

目录

英文缩略词

摘要

1 前言

1.1 凋亡与神经系统疾病

1.1.1 凋亡概述

1.1.2 凋亡与神经系统疾病

1.2 内皮素与神经系统疾病

1.2.1 内皮素概述

1.2.2 内皮素系统在神经系统的分布

1.2.3 内皮素在神经系统中的生理和药理作用

1.2.4 内皮素与神经系统疾病

1.3 内皮素与凋亡研究现状

1.3.1 ET与非神经系统凋亡的关系

1.3.2 ET与CNS凋亡的关系

1.4 NO.谷氨酸在ET和神经系统凋亡中的作用

1.5 研究目的及意义

研究目的:

研究意义:

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 主要实验试剂

2.1.2 主要实验器材与仪器:

2.1.3 实验所需主要溶液及配制

2.2 实验方法

2.2.1 大脑皮质神经元培养

2.2.2 流式细胞仪神经元凋亡检测

2.2.3 培养液中NO和谷氨酸浓度测定

2.2.4 实验分组

2.3 数据处理

3 结果

3.1 培养大鼠大脑皮质神经元的形态学及其和纯度鉴定

3.1.1 培养大鼠大脑皮质神经元的形态学

3.1.2 培养神经元的纯度鉴定

3.2 ET-1诱导培养大鼠大脑皮层神经元凋亡的作用

3.3 L-NAME和APV对ET-1诱导培养神经元凋亡的影响

3.4 ET-1对神经元培养液NO和谷氨酸水平的影响

3.5 L-NAME对ET-1刺激神经元释放NO水平的影响

4 讨论

4.1 大鼠大脑皮层神经元体外培养的建立

4.2 神经元凋亡检测手段的选择

4.3 ET-1诱导培养大鼠大脑皮层神经元凋亡

4.4 一氧化氮在ET-1诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡中的作用

4.4.1 NO参予ET-1诱导培养神经元凋亡的作用

4.4.2 ET-1刺激培养大鼠皮层神经元合成和释放NO及其机制

4.5 谷氨酸在ET-1诱导神经元凋亡中的作用

4.5.1 谷氨酸参予ET-1诱导培养神经元凋亡的作用

4.5.2 ET-1刺激培养大鼠皮层神经元释放谷氨酸及其机制

5 结论

参考文献

附录: 在校期间发表论文及获奖情况

致谢