CPG-ODN的筛选和辅助乙肝疫苗免疫孕鼠的作用

摘要

目的：设计并合成含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸的寡聚脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN),以期筛选出对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpG-ODN；观察不同剂量CPG-1826(5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’)辅助乙肝疫苗免疫孕鼠及仔鼠的作用。
　　方法：设计合成17条CpG-ODN,采用CpG-ODN刺激足月儿脐血单个核细胞,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法初步筛选CpG-ODN；应用RT-PCR法检测CpG-ODN刺激单个核细胞后Toll样受体9(TLR-9)的mRNA表达情况,进一步验证其免疫刺激作用。选择CpG-1826(不同剂量)作为乙肝疫苗佐剂辅助免疫孕鼠,用ELISA方法检测孕鼠和仔鼠血清乙肝表面抗体(HBsAb)水平,并观察仔鼠存活数量和生长发育指标的变化。
　　结果：筛选出2条对新生儿脐血单个核细胞具有明显免疫刺激作用的硫代修饰CpG-ODN,即CpG-1：5’-TCGCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGT-3’和CpG-6：5’-GACGTTCGAACGTCGACGTA-3’。MTT法测出CpG-1和CpG-6的吸光度值(A值)均高于空白对照(P<0.05)。RT-PCR法得出CpG-1和CpG-6的TLR9/GADPH吸光度比值均高于阳性对照CpG-2006和空白对照(P<0.05)。CPG-1826联合乙肝疫苗注射免疫孕鼠时,20 μg/只剂量组的孕鼠、仔鼠血清HBsAb含量均高于10 μg/只剂量组、40 μg/只剂量组、单纯乙肝疫苗组及空白对照组(P<0.05),但仔鼠存活数量以及体重、身长、胎脑和胎仔体重系数等生长发育指标间无显著性差异(P>0.05)。
　　结论：CpG-ODN 5’-TCGCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGT-3’和5’-GACGTTCGAACGTCGACGTA-3’能增强新生儿脐血单个核细胞的免疫效应；CPG-1826(20 μg/只)联合乙肝疫苗免疫孕鼠时,既能显著提高孕鼠及其仔鼠血清HBsAb水平,又不对仔鼠的生长发育造成不良影响,是一种较为理想的免疫佐剂。

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结论

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参考文献

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