碱性成纤维细胞生长因子与胶原对组织工程软骨体外构建的影响

摘要

目的：①在单层培养系统中评价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔生长板软骨细胞增殖和分化的作用。并筛选其用于体外软骨组织成团培养的最佳浓度：②以成团培养(pellet culture)为培养系统，以兔生长板软骨细胞为种子细胞，探讨bFGF与基质胶原单独及联合应用对体外软骨组织构建的影响，探索构建组织工程软骨的最佳条件。
　　方法：①分离并单层培养兔生长板软骨细胞，添加不同浓度的bFGF。②采用WST-8染色法检测细胞增殖倍数；甲苯胺蓝染色，观察软骨细胞外基质酸性粘多糖的分泌；羟脯氨酸法和阿新蓝(Alcian Blue)法测定基质产量；酶动力学方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性。③离心后三维成团培养兔生长板软骨细胞，并根据第一部分实验结果添加适量的bFGF和胶原。④HE染色，观察新生软骨组织形态；免疫组化检测Ⅰ型和Ⅱ型胶原表达；Hoechst33258染色，检测新生软骨组织中DNA含量；甲苯胺蓝染色，观察软骨细胞外基质酸性粘多糖的分泌；羟脯氨酸法与阿新蓝(Alcian Blue)法测定软骨细胞外基质中胶原与蛋白多糖的含量。
　　结果：在单层培养体系中：①经历多次传代后，软骨细胞发生了去分化，由多角形、

目录

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前言

第一部分 bFGF对生长板软骨细胞的生物学效应和量效关系

1.1 引言

1.2 实验材料

1.3 实验方法

1.4 实验结果

1.5 讨论

1.6 结论

第二部分 胶原与bFGF对生长板软骨细胞三维培养的影响

2.1 引言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

2.6 结论

2.7 附图

全文总结

参考文献

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