抑癌基因TSG101及其剪接变异体在正常人外周血细胞中的表达

摘要

目的：研究抑癌基因TSG101及其四种剪接变异体在健康女性外周血单个核细胞中的表达规律及突变,探讨该基因在乳腺癌发生发展过程中所扮演的角色。
　　方法：从健康女性外周血单个核细胞中提取总RNA,针对TSG101基因全长及其四种剪接变异体(V_A、V_B、V_C和V_D)设计5对特异引物进行RT-PCR,PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳观察分析,TSG101基因全长和四种剪接变异体PCR产物进行测序；并从部分样本提取基因组DNA,运用TSG101基因的第4外显子特异引物,进行PCR,对其产物进行序列测定。
　　结果：1、在37例健康女性外周血中均扩增出了TSG101全长及其四种剪接变异体片段。其中V_A、V_B和V_C的表达较一致,全长和V_D的表达存在差别,部分样本全长表达明显减弱。2、测序结果显示37例中7例(18.92%)均在TSG101基因第4外显子(mRNA第798bp处)存在“C→T”杂合性点突变；另30例(81.08%)经序列比对与基因库的TSG101mRNA序列100%一致。后来在DNA水平上也证实了突变的存在。
　　结论：1、在健康女性外周血细胞中存在TSG101基因的全长及四种剪接变异体片段。2、TSG101基因在健康女性存在杂合性突变,国内外尚未系统报道。该突变对剪接变异体B产生了错义突变。3、TSG101基因的杂合性突变可能提示TSG101基因外显子内存在单核苷酸多态性。

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