参芎葡萄糖注射液对急性心肌梗死的保护作用及与6种常用注射剂配伍风险评估研究

摘要

参芎葡萄糖注射液（Salivae Miltiorrhizae Liguspyragine Hydrochloride and Glucose Injection，SGI）主要成分为丹参素和盐酸川芎嗪，临床主要用于闭塞性脑血管疾病及其他缺血性疾病的治疗。目前，关于SGI对急性心肌梗死的保护作用及与临床常用注射剂配伍风险评估的研究鲜见报道。为获取更加全面的药品信息，本课题从有效性与安全性的角度，对其进行了三个部分的研究。
　　第一部分，我们进行了SGI对异丙肾上腺素诱导的急性心肌梗死模型大鼠的保护作用研究。
　　目的：利用异丙肾上腺素建立大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）模型，通过对心脏梗死面积、心电图、心功能指标、心肌酶学等的检测及心脏组织形态学的观察，评价SGI对急性心肌梗死大鼠的防治作用，并初步探讨其可能的作用机制。
　　方法：雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、血栓通注射液组（Panax Notoginseng Saponins,PNS）、SGI低、中、高剂量组，每天静脉给药1次，对照组和模型组大鼠静脉注射等体积5％葡萄糖注射液，连续7天。各组均于造模前检测心电图（记做0min），并于给药的第6、7天腹腔注射异丙肾上腺素3mg/kg，每日1次，连续2d，建立急性心肌梗死模型，并于第7天注射异丙肾上腺素后检测心电图、心率、心输出量、射血分数、左轴缩短率、左室舒张末期直径、左室收缩末期直径、左室舒张末期容积及左室收缩末期容积等心功能指标，用2,3,5-氯化三苯四唑（2,3,5-triphenylte-trazolium chloride,TTC）染色法测定心肌梗死面积，H&E染色观察心肌细胞病理组织结构的变化，并测定血清肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌钙蛋白I（cardiac Troponin I,cTn-I）及脑钠素（brain natriuretic peptide,BNP）等含量。
　　结果：
　　1.模型组心电图ST段较对照组明显抬高；心脏梗死面积较对照组明显增大（P<0.01）。心输出量、射血分数、左轴缩短率、左室舒张末期直径、左室收缩末期直径、左室舒张末期容积及左室收缩末期容积等心功能指标较对照组有显著性差异（P<0.01）。血清CK、LDH、cTn-I及BNP水平与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。以上实验结果提示给大鼠连续2天皮下注射3mg/kg的异丙肾上腺素可以成功制备急性心肌梗死大鼠模型。
　　2.SGI各剂量组心电图ST段较模型组都有所下降，其中SGI高、中剂量组ST段下降至与PR段水平的位置，心电图基本恢复正常水平。
　　3.SGI高、中、低剂量组及PNS组心肌梗死面积较模型组明显缩小（P<0.01或P<0.05）。
　　4.SGI高剂量组血清CK、LDH、cTn-I及BNP水平较模型组相比明显下降（P<0.01），SGI中剂量组血清CK、cTn-I及BNP水平较模型组相比明显下降（P<0.05），SGI低剂量组血清CK水平较模型组相比明显下降（P<0.05）。
　　5.心肌组织H&E染色情况显示，对照组大鼠心肌纤维排列整齐，染色均匀、结构清晰，心肌无坏死病灶及炎性细胞浸润等病理性改变。模型组大鼠心肌损伤明显，心肌纤维排列疏松紊乱，心肌细胞呈颗粒性变及嗜酸性变，间质血管扩张充血，外膜下心肌间及心内膜出现大量炎性细胞浸润。SGI高、中、低剂量组及PNS组大鼠心肌损伤较模型组改变轻微，心肌纤维排列整齐，部分排列疏松，部分心肌细胞呈颗粒性变及嗜酸性变，间质少量血管扩张充血，外膜下心肌间及心内膜出现少量炎性细胞浸润。
　　6.SGI高、中、低剂量组及PNS组心输出量、射血分数、左轴缩短率、左室舒张末期直径、左室收缩末期直径、左室舒张末期容积及左室收缩末期容积等心功能指标较模型组有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。
　　第二部分、我们进行了SGI对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用研究。
　　目的：研究SGI对阿霉素(Doxorubicin,DOX)所致心肌细胞损伤的保护作用，并探讨其作用机制。
　　方法：体外培养H9c2细胞，采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞毒性，荧光探针法检测细胞内钙离子浓度。
　　结果:
　　1.DOX可导致细胞内钙离子浓度升高，细胞活力下降。
　　2.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）及SGI干预均可显著减轻细胞内钙超载（P<0.01），并对细胞活力有一定的改善作用。
　　第三部分、我们进行了SGI与6种临床常用注射剂配伍风险评估。
　　目的：评估SGI与6种临床常用注射剂配伍风险。
　　方法：以SGI为模式药，以6种药物注射剂，即左氧氟沙星氯化钠注射液（Levofloxacin and Sodium Chloride Injection,LSI）、注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠（Cefoperazone Sodium and Sulbactam Sodium for Injection,CSI）、前列地尔注射剂（Alprostadil Injection,AI）、右旋糖酐40葡萄糖注射液（Dextran40 Glucose Injection,DI）、骨肽注射剂（Ossotide Injection,OI）、甘油果糖氯化钠注射液（Glycerol Fructose and Sodium,GSI）为配伍注射剂，采用等温滴定量热法（isothermal titration calorimetry,ITC）分别考察药物间相互作用，以热力学参数吉布斯自由能变（ΔG）、焓变（ΔH）、熵变（ΔS）判断溶合反应类型，同时通过对比不同注射剂混合前后化学HPLC图谱、pH值、不溶性微粒数等特征信息对注射液配伍风险进行综合评价。
　　结果：
　　1.ITC法检测发现：在SGI和LSI、CSI、AI、OI、GSI的混合过程中ΔG＜0，表明上述混合过程发生自发反应。其中，CSI、AI和SGI的反应是焓驱反应（│ΔH│ T│ΔS│），这意味着主要发生物理反应，即某些物理性质如溶解度可能发生改变。然而，在SGI和DI溶合的过程ΔG＞0，说明二者混合未发生自发反应，混合体系稳定；
　　2.HPLC法检测发现：GSI与SGI混合前后HPLC图谱对比可见GSI吸收峰面积发生改变；
　　3.外观及pH值检测发现：各配伍注射剂与SGI混合后外观及pH值于4h内未见明显变化；
　　4.不溶性微粒检测发现：LSI、CSI与SGI配伍后4h内不溶性微粒总数有增多的趋势，其中LSI超出了中国药典规定；
　　5.渗透压检测发现：LSI、CSI、AI、DI、OI、GSI与等体积的SGI混合后4h内渗透压未见明显变化。
　　结论与提示：
　　1.SGI可缩小大鼠心肌梗死面积，降低心肌酶CK、LDH、cTn-I及BNP的含量，保护心肌细胞，抑制心肌损伤，促进心功能恢复正常，对异丙肾上腺素诱导的急性心肌梗死模型大鼠有较好的保护作用；
　　2.SGI可显著减轻DOX诱导的细胞内钙超载，且中剂量（0.28μmol/L）和高剂量组（0.48μmol/L）降低细胞钙离子浓度较低剂量组更明显。提示SGI的心肌保护作用可能与其减轻细胞内钙超载作用有关；
　　3.LSI、CSI、AI、OI、GSI与SGI混合可发生自发反应，存在配伍风险，临床应谨慎合用；而DI与SGI混合未发生自发反应，存在配伍风险可能性低。
　　综上所述，本研究进行了SGI对急性心肌梗死的保护作用及与临床常用注射剂配伍风险评估的研究。研究结果表明SGI可缩小大鼠心肌梗死面积，降低心肌酶CK、LDH、cTn-I及BNP的含量，保护心肌细胞，抑制心肌损伤，促进心功能恢复正常，证实了SGI对急性心肌梗死有较好的保护作用；而且SGI可显著减轻 DOX诱导的细胞内钙超载，说明SGI心肌保护作用可能与其减轻心肌细胞内钙超载作用有关。另外，配伍安全性方面研究发现SGI与LSI、CSI、AI、OI、GSI混合可发生自发反应，存在配伍风险，而与DI混合未发生自发反应，存在配伍风险可能性低，且pH值、不溶性微粒、渗透压等检测结果亦不同程度地印证了该结论，提示在临床应用上SGI与LSI、CSI、AI、OI、GSI合用需谨慎。

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第一章 前言

1.1引言

1.2急性心肌梗死的病理机制

1.2.1急性心肌梗死发病机制

1.2.2急性心肌梗死病理机制

1.3急性心肌梗死的诊断与治疗

1.3.1心肌梗死的诊断

1.3.2.急性心机梗死的治疗

1.4中药单味药、有效成分及中药复方防治AMI损伤的研究进展

1.5 SGI的研究进展

1.6 SGI临床应用不良反应研究进展

1.6.1 ADR 的临床表现及相关原因分析

1.6.2 ADR 与用药方案的关系

1.7本课题研究目的、意义、创新性

第二章 正文

2.1 实验一 SGI 对异丙肾上腺素诱导的急性心肌梗死模型大鼠的保护作用研究

2.1.1 材料

2.1.2方法

2.1.3 结果

2.1.4 讨论

2.2 实验二 SGI对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用研究

2.2.1 材料

2.2.2 方法

2.2.3 结果

2.2.4 讨论

2.3 实验三 SGI与6种临床常用注射剂配伍风险评估

2.3.1材料

2.3.2 方法

2.3.3 结果

2.3.4 讨论

总结与展望

参考文献

在校期间发表论文清单

致谢