蝴蝶兰外植体褐变机理的研究

摘要

不同的培养基影响蝴蝶兰外植体褐变的发生,该实验中蝴蝶兰外植体在MS纸桥培养基上褐变率最低,1/2MS次之,MS、B5和N6培养基上蝴蝶兰外植体褐变率相同.无激素培养基使外植体黄化.MS培养基中铁盐加倍和微量元素缺乏造成外植体严重褐变,培养基积累很多褐色物质;微量元素加倍使褐变减轻;琼脂含量减少,外植体褐变加重.增加光照强度外植体褐变严重,黑暗培养的外植体褐变发生推迟而且程度轻.培养基添加AA外植体褐变与对照没有明显差别;添加了2000mg/L或1000mg/L AC的培养基,都能使外植体黄化;培养基中加入柠檬酸的外植体褐变比对照轻.外植体在添加了PVP的培养基中褐变情况与对照相同,但培养基中褐色成分没有扩散.蝴蝶兰外植体在培养的第5天开始发生褐变,PPO和POD活力在褐变发生前期都升高,褐变发生后酶活力开始下降.同工酶谱分析,培养2天POD酶谱有四条酶带出现,随培养天数的延长,除了酶带强弱不同外,没有明显的变化.PPO同工酶谱略有变化,迁移率为0.42的酶带活性较强,在褐变过程中一直出现.蝴蝶兰外植体褐变过程中,总酚含量随外植体褐变增强而逐渐增加,PAL活力与总酚含量变化基本一致.叶绿素a和b含量却逐渐降低,与外植体的颜色变化相符.PAL参与了褐变发生过程.蝴蝶兰外植体褐变发生过程中,CAT和SOD活力在培养初期开始下降,外植体褐变后活力逐渐有小幅度升高,但总体水平比对照低.MDA含量在培养第2天高于对照两倍,随后一直维持较高的水平.外植体发生褐变时膜脂发生过氧化,膜的完整性被破坏.扫描电镜观察蝴蝶兰褐变外植体细胞维管束被鞣质充填,外植体叶片的上表皮变形皱缩,下表皮没有明显的变化,薄壁细胞里有不明物质沉积.显微镜观察证实褐变细胞的叶绿体数量减少,FeCl3染色维管束着色较深.用丙酮提取褐变培养基中物质,经颜色反应初步确定存在儿茶素型缩和鞣质,质谱分析确定有四种成分,说明蝴蝶兰外植体褐变是酚类氧化导致细胞生理功能的紊乱导致细胞死亡.

目录

缩略词表

第一章文献综述

第二章几种基本培养基以及培养条件对蝴蝶兰外植体褐变的影响

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果和分析

2.2.1基本培养基对蝴蝶兰外植体褐变的影响

2.2.2 MS培养基成分变化对蝴蝶兰外植体褐变的影响

2.2.3光照对蝴蝶兰叶片外植体褐变的影响

2.2.4抗氧化剂和吸附剂对蝴蝶兰外植体褐变的影响

3.讨论

3.1基本培养基对蝴蝶兰叶片外植体褐变的影响

3.2 MS培养基成分变化对蝴蝶兰外植体褐变的影响

3.3光照对蝴蝶兰外植体褐变的影响

3.4抗氧化剂和吸附剂对蝴蝶兰外植体褐变的影响

第三章蝴蝶兰褐变外植体的结构观察

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果和分析

2.1蝴蝶兰褐变外植体扫描电镜观察

2.2蝴蝶兰褐变外植体显微镜观察

3.讨论

第四章蝴蝶兰外植体褐变过程中总酚含量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量以及PPO、POD和PAL的变化

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果和分析

2.1蝴蝶兰外植体褐变过程中PPO活力的变化

2.2.蝴蝶兰外植体褐变过程中PPO同工酶谱的变化

2.3蝴蝶兰外植体褐变过程中POD活力的变化

2.4.蝴蝶兰外植体褐变过程中POD同工酶谱的变化

2.5.蝴蝶兰外植体褐变过程中总酚含量变化

2.6 蝴蝶兰外植外褐变过程中PAL的活力的变化

2.7蝴蝶兰外植体褐变过程中可溶性蛋白的变化

2.8.蝴蝶兰外植体褐变过程中叶绿素含量变化

3.讨论

3.1蝴蝶兰外植体褐变过程中PPO和POD活力的变化

3.2蝴蝶兰外植体褐变过程中PPO和POD同工酶谱的变化

3.3 褐变过程中总酚含量和PAL的活力的变化

3.4蝴蝶兰外植体褐变过程中PPO、POD、PAL和总酚之间的关系

3.4蝴蝶兰外植体褐变过程中蛋白质和叶绿素含量变化

第五章蝴蝶兰外植体褐变与膜脂过氧化

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果和分析

2.1蝴蝶兰外植体褐变过程中MDA含量变化

2.2蝴蝶兰外植体褐变过程中SOD活力变化

2.3褐变过程中CAT活力变化

3讨论

第六章蝴蝶兰外植发生褐变成分的初步分析

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果和分析

2.1.蝴蝶兰外植体褐变成分的颜色反应

2.2.褐变成分和邻苯二酚吸收光谱

2.3.质谱结果分析

3讨论

参考文献

附录 攻读硕士期间发表的论文

致谢

硕士学位论文授权书