华南师范大学硕士学位论文答辩合格证明
第一章荧光共振能量转移(FRET)技术及其应用简介
1 FRET基本原理
2 FRET应用
2.1检测酶活性变化
2.2关于膜蛋白的研究
2.3细胞内分子之间相互作用
3展望
第二章激光共聚焦扫描显微镜系统及其应用简介
1共焦扫描显微镜的发展简史
2激光共焦扫描显微镜的原理及特性
2.1激光共焦扫描显微镜的原理
2.2 LCSM的光学特性
3激光共焦扫描显微镜系统在生物、医学中的应用
3.1胞内Ca2+的研究
3.2细胞骨架的研究
3.3病变细胞的研究
3.4药物效用的研究
第三章利用FRET技术对活细胞生理条件PKA酶活性的研究
1材料与方法
1.1质粒及其构建
1.2瞬时转染
1.3稳定表达报告蛋白(AKAR)的人肺癌细胞系的筛选
1.4荧光成像
2结果
2.1 Forskolin引起PKA酶活性变化的无损伤实时记录
2.2 EGF引起PKA酶活性变化的无损伤实时记录
2.3 EGF引起PKA酶活性变化的空间分布差异
3讨论
第四章利用FRET技术对活细胞生理条件下凋亡蛋白的研究
1材料与方法
1.1材料
1.2质粒构建
1.3细胞培养与转染
1.4凋亡诱导
1.5激光共聚焦扫描显微镜(LSM)
1.6微型CO2培养箱
2结果
2.1 YFP-14-3-3在人类肺癌细胞以及293细胞中的表达
2.2发展FRET系统检测活细胞生理条件下tBid与14-3-3蛋白间相互作用
2.3单个人类肺癌细胞的Bid-CFP与YFP-14-3-3蛋白相互作用的时空成像
2.4 tBid与14-3-3蛋白各自在细胞内的动态分布
2.5 tBid与14-3-3蛋白相互作用的的动态过程
3讨论
第五章构建融合蛋白YFP-14-3-3
第六章pH升高诱导细胞凋亡的研究
1材料与方法
1.1材料
1.2细胞培养与转染
1.3稳定表达SCAT3探针的肺癌细胞系筛选
1.4激光共聚焦扫描显微镜(LSM)
1.5微型CO2培养箱
2结果
2.1没有任何刺激因子加入的情况下Bid-CFP定位线粒体
2.2使用微型二氧化碳培养箱96小时内Bid-CFP不出现定位线粒体的现象
2.3当细胞暴露在空气中Bid-CFP定位线粒体过程的时空成像
2.4温度改变不会引起Bid蛋白定位线粒体
2.5碱性条件有调Bid-CFP蛋白定位线粒体
2.6碱性条件诱导的Caspase-3激活
3 讨论
第七章展望
1激光共聚焦扫描显微镜在生物及医学领域中的应用前景展望
2荧光成像在分子生物学研究研究中的应用前景展望
3 FRET技术在细胞生物学领域中的应用前景展望
结束语
参考文献
发表论文
致谢
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