基于FRET影像技术可视化研究活细胞在分化诱导过程中的FAK和Src信号活性

摘要

使用基于荧光共振能量转移(FRET)技术的FAK和Src生物传感器(DNA荧光探针),实时监控活细胞在诱导过程中FAK和Src的变化活动.结果显示,在诱导分化试剂加入后,Lyn-、 Kras-、cyto-标记的3种不同FAK和Src DNA探针发生瞬时磷酸化,荧光共振能量转移明显和迅速,从活性变化角度证实了FAK和Src影响HMSCs的成骨分化.同时,通过FRET技术可视化研究了HMSCs中桩蛋白paxillin在诱导剂刺激下的活性变化,发现paxillin主要在细胞伪足、边缘发生磷酸化变化,HMSCs形态从纤状向纺球状改变,导致细胞骨架重建,推测是诱导剂促使细胞骨架变化从而引起细胞中FAK和Src活性的变化.