高铜对红耳龟的抗氧化功能和血液生化指标的影响

摘要

随着近年来红耳龟养殖行业的兴起和普及，以及红耳龟宠物养殖爱好者的增加，对红耳龟医疗水平提升的需求也随之增加。动物血液生化参考值作为一项重要的健康指标，是临床医疗和生物医学研究的重要数据，然而目前国内缺少关于红耳龟正常血液生化参考值的建立，且因实验室环境、饮食、大小等因素，结果不尽相同。铜作为动物必需的微量元素，以酶辅助因子的形式参与体内30多种酶的组成和活化，对动物的造血、消化、生长、繁殖、免疫等生理功能具有重要作用，日粮中添加高铜促动物生长，而过量的铜则抑制生长、引发中毒，造成肝、肾功能损伤，这些损伤可间接地通过血液参数指标显现出来。本论文初步建立了红耳龟实验室正常血液生化和抗氧化指标参考值，并探讨不同剂量铜对红耳龟抗氧化功能和血液生化指标的影响。
　　本课题将32只2岁龄、体重在600-1000g左右、健康的红耳龟随机分为4组（每组8只，雌雄各半），浸泡于4个不同浓度（A组0.01mg/L、B组1mg/L、C组3mg/L和D组6mg/L）的铜溶液中进行为期5个月的试验，实验开始和结束时分别测定每只龟体重，计算各组平均体重增长率，并在浸泡前1天、浸泡第10、30、60、90和120天进行颈静脉采血，用于血涂片制备、血清抗氧化能力检测和血液生化指标测定，统计分析各指标变化，以此模拟低、中和高铜浸泡下红耳龟部分生理及血液指标的改变，结果表明：
　　与空白对照A组平均体重增长率相比，低铜B组增长率极显著性增高（P<0.001）；中铜C组平均增重率显著性增高（P<0.05）；高铜D组平均体重增长率降低但不明显。
　　根据空白对照A组及所有红耳龟在浸泡前所测得的血液生化指标及抗氧化酶活力值，一个初步的实验室红耳龟正常血液参数范围被建立，具有一定的参考价值。
　　低铜B组总抗氧化能力（T-AOC）、铜锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）得到稳定提高，并且随着浸泡时间的延长而升高；中铜C组在浸泡后的短时间内具有提高的三种抗氧化酶活力，但是浸泡时间越长，其活力反而逐渐下降；高铜D组三种抗氧化酶活力在各时间点不及对照A组，表现出抑制的情况；B、C丙二醛（MDA）含量较A组先有升高，随后逐渐下降或保持相对平稳，D组丙二醛随浸泡时间持续升高。
　　各组红耳龟血液生化指标变化趋势随着铜浓度和浸泡时间的改变具有一定的规律：随浸泡铜浓度增加，乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶活力（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性在短时间内升高，之后下降到与对照A组相似或更低；在高铜浓度D组，血液肌酸激酶（CK）、血糖（GLU）、血总胆红素（TBIL）、尿酸（UA）和尿素含量显著高于对照A组；钙（CA）、磷（P）、肌酐（CREA）、血总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）含量变化不大。
　　各组血细胞涂片间没有明显的区别，红细胞形态大小正常，各种白细胞：淋巴细胞、嗜碱/酸性粒细胞、异质细胞及单核细胞偶有出现，形态大小正常。

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1 前 言

1.1红耳龟的研究进展

1.1.1红耳龟的引入及在国内目前的分布状况

1.1.2红耳龟作为经济动物养殖的优点

1.1.3红耳龟的生活喜好和饲养方式

1.1.4红耳龟常见易患疾病

1.1.5红耳的疾病防治

1.2铜在水生养殖中的研究进展

1.2.1铜的存在和分布形式

1.2.2铜在动物体内的动态平衡

1.2.3铜的生理作用及在水产养殖中的使用

1.2.4高铜对水生动物的影响

1.3血液参数在疾病中的诊断意义

1.4本文研究目的与意义

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物及分组

2.1.2 主要仪器设备

2.1.3主要试剂及药品

2.2实验方法

2.2.1饲养与管理

2.2.2水体铜含量的测定

2.2.3形体指标及临床症状的检查

2.2.4血液采集

2.2.5血细胞涂片制备

2.2.6 T-AOC、Cu-ZnSOD、GSH-Px活力和MDA含量的测定

2.2.7血液生化指标检测

2.2.8数据处理

3 实验结果和分析

3.1铜的标准曲线的制备

3.2实验前后体重增长率比较

3.3红耳龟抗氧化能力及实验室血液生化指标的初步建立

3.4高铜对红耳龟血清抗氧化酶活性及氧化产物丙二醛含量的影响

3.4.1血清总抗氧化能力（T-AOC）变化

3.4.2血清（Cu-Zn SOD）的活力变化

3.4.3血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力变化

3.4.4 血清丙二醛（MDA）的含量变化

3.5高铜对红耳龟血液生化指标的影响

3.5.1高铜对血清乳酸脱氢酶的影响

3.5.2高铜对碱性磷酸酶（ALP）活力的影响

3.5.3高铜对天冬氨酸氨基转移酶（AST）活力的影响

3.5.4高铜对肌酸激酶（CK）活力的影响

3.5.5高铜对血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）活力的影响

3.5.6高铜对血清磷（P）浓度的影响

3.5.7高铜对血钙（Ca）浓度的影响

3.5.8高铜对血液总胆红素（TBIL）浓度的影响

3.5.9高铜对血肌酐（CREA）的影响

3.5.10高铜对血总蛋白（TP）含量的影响

3.5.11高铜对白蛋白（ALB）含量的影响

3.5.12高铜对血糖（GLU）的影响

3.5.13高铜对尿素（UREA）浓度的影响

3.5.14高铜对尿酸（UA）含量的影响。

3.6血液细胞涂片

4讨论

4.1高铜对红耳龟生长速率的影响

4.2初步建立的红耳龟实验室血液参数的意义

4.3高铜对血清抗氧化酶及丙二醛活力的影响

4.3.1高铜对血清T-AOC活力的影响

4.3.2高铜对血清Cu-Zn SOD活力的影响

4.3.3高铜对血清GSH-Px活力的影响

4.3.4高铜对血清MDA含量的影响

4.4高铜对血液生化指标的影响

4.5高铜浓度下血细胞的改变

全文结论

致谢

参考文献