黎蒴与广宁红花油茶种质资源遗传多样性研究

摘要

黎蒴(Castanopsis fissa)与广宁红花油茶(Camellia semiserrata)是广东最有地方特色的乡土树种。黎蒴具有天然下种更新和萌芽更新力强的特点，是营造水源涵养林、能源林、水土保持林和改造次生林的优良树种，而广宁红花油茶是中国南方重要的木本食用油料树种。开展黎蒴与广宁红花油茶种质资源遗传多样性研究有利于了解其遗传背景和地理分布规律，为其优质种源收集、保护及良种选育奠定基础。本文以黎蒴和广宁红花油茶为研究对象，开发其SRAP分子标记，找到其DNA的分子多态性，进行遗传多样性分析，旨在为黎蒴、广宁红花油茶的良种选育提供依据，主要结果如下：
　　1.建立并优化了黎蒴、广宁红花油茶SRAP反应体系。利用正交设计得到稳定、可靠且重复性强的SRAP-PCR反应体系(25μL)：10x PCR Buffer(Mg2+free)2.5μL、模板DNA量40ng、Mg2+2.0mmol·L-1、dNTPS0.175 mmol·L-1、引物0.5μmol·L-1、Taq酶0.2 U。
　　2.黎蒴遗传多样性。13对引物组合总共扩增出236条带，多态性条带为195条，多态性频率为82.63％。种源Nei's基因多样度(h)、Shannon多样性指数(I)、多态位点百分比(PPL)变化范围分别为0.0992-0.3066、0.1488-0.4555及28.81%-85.59%，平均值分别为0.1956、0.2923及55.24%，表明黎蒴遗传多样性处于中等水平，广东平远种源遗传多样性丰富，各个指标均为最高值，而广东蕉岭和广东揭西遗传多样性水平最低。聚类分析表明，当阈值为0.88时，可将黎蒴28个种源分为6大类，Ⅰ类为广东英德、广西高田、广东兴宁、广东阳东和广东新兴，Ⅱ类为广东怀集、广东翁源、广东龙川、广东五华、福建南平和福建永安，Ⅲ类为广东武江、广东阳春、福建福州、广东大埔和广东平远，Ⅳ类为广东仁化、广东揭西、广东潮安、广东蕉岭、福建南靖和广西小镜，Ⅴ类为广东增城、广西镇龙和福建顺昌，Ⅵ类为广东揭东、广东鼎湖和广东封开。广东揭东与广东鼎湖遗传距离为0.0134，遗传距离最小，说明二者的亲缘关系最近。AMOVA分子变异方差分析显示，在黎蒴总的遗传变异中，种源内占60%，而种源间占40%。
　　3.广宁红花油茶遗传多样性。13对引物组合总共扩增出206条带，多态性条带为187条，多态性频率为90.78%。种源Nei's基因多样度(h)、Shannon多样性指数(I)、多态位点百分比(PPL)变化范围分别0.2179-0.3563、0.3217-0.5248及58.25%-92.72%，平均值分别为0.3078、0.4563及83.62%，表明广宁红花油茶具有丰富的遗传多样性，广东增城的广宁红花油茶遗传多样性最高，广东清远的遗传多样性相对较低。聚类分析表明，当阈值为0.93时，可将广宁红花油茶4个种源分为2大类，广东清远单独成为一类，第二类包括广东广宁县、广东增城、广东云浮。广东云浮与广东增城遗传距离为0.0193，遗传距离最小，说明二者的亲缘关系最近。AMOVA分子变异方差分析显示，在广宁红花油茶总的遗传变异中，种源内占95%，而种源间仅占5%。

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1 前言

1.1 黎蒴研究进展

1.2 广宁红花油茶研究进展

1.3 遗传多样性研究

1.4 本研究的目的和意义

1.5 研究内容

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验试剂与仪器

2.3 SRAP引物

2.4 试验方法

3 结果与分析

3.1 基因组DNA的提取与检测

3.2 SRAP-PCR反应体系的建立与优化

3.3 SRAP-PCR引物筛选

3.4 黎蒴种质资源遗传多样性

3.5 广宁红花油茶遗传多样性分析

4 结论与讨论

4.1 基因组DNA的提取

4.2 SRAP-PCR反应体系的建立与优化

4.3 遗传差异分析

4.4 遗传多样性分析

致谢

参考文献

附录：