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两株链霉菌对荔枝霜疫病的防病潜力和防病机理研究

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第一章 前言

1.1 荔枝的概述

1.2 荔枝霜疫病的研究进展

1.2.1 荔枝霜疫病的危害

1.2.2 荔枝霜疫霉的生物学特性

1.2.3 荔枝霜疫病的防治措施

1.2.3.1农业防治

1.2.3.2 化学防治

1.2.3.3 生物防治

1.3 链霉菌的研究概况

1.3.1 链霉菌的分布情况及形态特征

1.3.2 链霉菌分类鉴定方法

1.3.3 链霉菌在植物病害防治上的应用

1.3.4 链霉菌的生防作用机制

1.3.4.1抗生作用

1.3.4.2 寄生作用

1.3.4.3 竞争作用

1.3.4.4 促生作用

1.3.4.5诱导抗性

1.4 微生物产生的挥发性物质在植物病害防治中的应用

1.4.1 真菌产生的挥发性物质在植物病害防治中的应用

1.4.2 细菌产生的挥发性物质在植物病害防治中的应用

1.4.3 链霉菌挥产生的发性抑菌物质在植物病害防治中的应用

1.5 研究的目的与意义

第二章 荔枝霜疫霉拮抗放线菌的筛选

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.1.1 供试菌株

2.1.1.2 培养基

2.1.2.1.1 土壤样品的采集

2.1.2.1.2 放线菌株的分离及保藏

2.1.2.2 荔枝霜疫霉生防放线菌的筛选

2.1.2.2.1 荔枝霜疫霉生防放线菌的初选

2.1.2.2.2 荔枝霜疫霉生防放线菌的复筛

2.1.2.2.3 生防放线菌发酵滤液对荔枝霜疫霉抑菌活性测定

2.1.2.2.4 产生挥发性抑菌物质生防放线菌的筛选

2.1.2.2.5 放线菌TJGA-19菌株活体的抑菌谱测定

2.1.2.2.6 放线菌TJGA-19发酵滤液的抑菌谱测定

2.2 结果与分析

2.2.1 土壤放线菌分离纯化

2.2.2 荔枝霜疫霉生防放线菌的初选

2.2.3 荔枝霜疫霉生防放线菌的复选

2.2.4 生防放线菌发酵滤液对荔枝霜疫霉抑菌活性测定

2.2.5产生挥发性物质(VOCs)抑制荔枝霜疫霉的菌株

2.3 小结

第三章 放线菌TJGA-19、BWL-H1的鉴定

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.1.1 供试菌株

3.1.1.2 供试培养基

3.1.2 实验方法

3.1.2.1 16S rDNA序列分析

3.1.2.1.1 基因组DNA提取

3.1.2.1.2 PCR扩增

3.1.2.2.1 光学显微镜观察

3.1.2.2.2 扫描电镜观察

3.1.2.3 培养特征观察

3.1.2.4 生理生化特性测定

3.1.2.4.1碳源利用

3.1.2.4.2氮源利用

3.1.2.4.3 pH耐受实验

3.1.2.4.4 NaCl耐受实验

3.1.2.4.5 温度耐受实验

3.1.2.4.6 过氧化氢酶实验

3.1.2.4.7 脲酶实验

3.1.2.4.8 酯酶实验

3.1.2.4.9 明胶液化实验

3.1.2.4.10 淀粉水解实验

3.1.2.4.11 纤维素利用实验

3.1.2.4.12 硫化氢产生实验

3.2 结果与分析

3.2.1.2 菌株TJGA-19 的16S rDNA序列分析及系统发育树构建

3.2.1.3 菌株TJGA-19形态特征

3.2.1.4 菌株TJGA-19培养特征

3.2.1.5 菌株TJGA-19生理生化特征

3.2.2 菌株BWL-H1的多相分析鉴定

3.2.2.1 菌株BWL-H1的基因组DNA提取及扩增

3.2.2.2 菌株BWL-H1 的16S rDNA序列分析及系统发育树构建

3.2.2.3 菌株BWL-H1形态特征

3.2.2.5 菌株BWL-H1生理生化特征

3.2.3 菌种鉴定

3.2.3.1菌株TJGA-19的鉴定

3.2.3.2 菌株BWL-H1的鉴定

3.3 小结

第四章 阿孙链霉菌TJGA-19发酵条件研究

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.1.1 供试菌株

4.1.1.2 培养基

4.1.2 实验方法

4.1.2.1 种子液的制备

4.1.2.2 荔枝霜疫霉孢子囊悬浮液的制备

4.1.2.3 抑菌活性测定方法

4.1.2.4 菌株TJGA-19发酵培养基营养成分优化

4.1.2.4.1 无菌发酵滤液的制备

4.1.2.4.2 碳源筛选

4.1.2.4.3 有机氮源筛选

4.1.2.4.4 无机氮源筛选

4.1.2.4.5 微量元素筛选

4.1.2.5菌株TJGA-19发酵培养基营养成分用量优化

4.1.2.5.1 可溶性淀粉用量筛选

4.1.2.5.2 黄豆粉用量筛选

4.1.2.5.3 (NH4)2SO4用量筛选

4.1.2.5.4 NaCl用量筛选

4.1.2.5.5 酵母粉用量筛选

4.1.2.6 菌株TJGA-19发酵条件优化

4.1.2.6.1 发酵温度筛选

4.1.2.6.2 发酵时间筛选

4.1.2.6.3 培养基pH值筛选

4.1.2.6.4 摇床转速筛选

4.1.2.6.5 装液量筛选

4.1.3 优化培养条件后的抑菌活性检测

4.1.4 数据统计与分析

4.2 结果与分析

4.2.1.1 不同碳源对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.1.2 不同有机氮源对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.1.3 不同无机氮源对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.1.4 不同微量元素对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.2 菌株TJGA-19发酵培养基营养成分用量优化

4.2.2.1 可溶性淀粉用量对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.2.3 (NH4)2SO4用量对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.2.4 NaCl用量对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.2.5 酵母粉用量对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.3 菌株TJGA-19发酵条件优化

4.2.3.1 发酵温度对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.3.2 发酵时间对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.3.3 培养基pH对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.3.4 摇床转速对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.3.5 装液量对菌株TJGA-19抑菌活性物质的影响

4.2.4 优化培养条件后的抑菌活性检测

4.3 小结

第五章 阿孙链霉菌TJGA-19发酵滤液稳定性研究

5.1 材料与方法

5.1.1 材料

5.1.1.1 供试菌株

5.1.1.2 培养基

5.1.2 实验方法

5.1.2.4 菌株TJGA-19无菌发酵滤液的制备

5.1.2.5 发酵滤液稳定性测定

5.1.2.5.1 光照稳定性

5.1.2.5.2 热稳定性

5.1.2.5.3 蛋白酶K稳定性

5.1.2.5.4 酸碱稳定性

5.1.2.5.5 紫外光的稳定性

5.1.3 数据统计与分析

5.2 结果与分析

5.2.1 光照对抑菌活性物质稳定性的影响

5.2.2 温度对抑菌活性物质稳定性的影响

5.2.3 100℃下不同处理时间对抑菌活性物质稳定性的影响

5.2.4 蛋白酶K对抑菌活性物质稳定性的影响

5.2.5 pH对抑菌活性物质稳定性的影响

5.2.6 紫外光对抑菌活性物质稳定性的影响

5.3小结

第六章 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉的抑菌机理研究

6.1 材料与方法

6.1.1 材料

6.1.2 实验方法

6.1.2.5 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

6.1.2.6 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉孢子囊萌发的影响

6.1.2.7菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉卵孢子产量的影响

6.1.2.8 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉菌丝形态的影响

6.1.2.8.1 光学显微镜观察

6.1.2.8.2 扫描电镜观察

6.1.2.8.3 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉细胞膜透性的影响

6.1.2.9 菌株TJGA-19发酵滤液对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

6.1.3 数据统计与分析

6.2 结果与分析

6.2.1 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

6.2.2 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉孢子囊萌发的影响

6.2.3 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉卵孢子产量的影响

6.2.4 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉菌丝形态的影响

6.2.4.1 光学显微镜观察

6.2.4.2 扫描电镜观察

6.2.5 菌株TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉细胞膜透性的影响

6.2.6 菌株TJGA-19发酵滤液对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

6.3 小结

第七章 阿孙链霉菌TJGA-19产生的挥发性物质对荔枝霜疫霉的抑菌机理及防病效果研究

7.1 材料与方法

7.1.1 材料

7.1.1.1 供试菌株

7.1.1.1.1 生防菌

7.1.1.1.2 靶标菌

7.1.1.3 培养基

7.1.2 实验方法

7.1.2.1 荔枝霜疫霉孢子囊悬浮液的制备

7.1.2.2 阿孙链霉菌TJGA-19产生挥发性物质的制备

7.1.2.3培养时间对阿孙链霉菌TJGA-19产生挥发性物质抑菌活性的影响

7.1.2.4 活性碳对阿孙链霉菌TJGA-19产生的挥发性物质抑菌活性的影响

7.1.2.5 挥发性物质对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

7.1.2.6 挥发性物质对荔枝霜疫霉孢子囊萌发的影响

7.1.2.9 挥发性物质对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

7.1.2.10 挥发性物质的收集及鉴定

7.1.3 数据统计与分析

7.2 结果与分析

7.2.1 培养时间对阿孙链霉菌TJGA-19产生挥发性物质抑菌活性的影响

7.2.2 活性碳对阿孙链霉菌TJGA-19挥发性物质抑菌活性的影响

7.2.3 挥发性物质对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

7.2.4挥发性物质对荔枝霜疫霉孢子囊萌发的影响

7.2.5 挥发性物质对荔枝霜疫霉卵孢子产量的影响

7.2.6 挥发性物质对荔枝霜疫霉超微结构的影响

7.2.7 挥发性物质对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

7.2.8 挥发性物质成分分析

7.3 小结

第八章 粪生链霉菌BWL-H1产生的挥发性物质对荔枝霜疫霉的抑菌机理及防病效果研究

8.1 材料与方法

8.1.1 材料

8.1.2.1 荔枝霜疫霉孢子囊悬浮液的制备

8.1.2.2 粪生链霉菌 BWL-H1产生挥发性物质的制备

8.1.2.3 粪生链霉菌 BWL-H1产生的挥发性物质的抑菌谱测定

8.1.2.5 活性碳对粪生链霉菌 BWL-H1产生的挥发性物质抑菌活性的影响

8.1.2.6 挥发性物质对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

8.1.2.7 挥发性物质对荔枝霜疫霉孢子囊萌发、芽管形态的影响

8.1.2.8 挥发性物质对荔枝霜疫霉卵孢子产量的影响

8.1.2.10 挥发性物质对荔枝霜疫霉超微结构的影响

8.1.2.10.1 扫描电镜制样

8.1.2.10.2 透射电镜制样

8.1.2.11 挥发性物质对荔枝霜疫霉在离体叶片上侵染过程的影响

8.1.2.12挥发性物质对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

8.1.2.13 挥发性物质对离体枝条荔枝霜疫病的防治效果

8.1.2.14挥发性物质对荔枝果实霜疫病的防治效果

8.1.2.15挥发性物质的收集及鉴定

8.1.2.16 人工合成挥发性化合物对荔枝霜疫霉的抑制作用

8.1.2.16.1 人工合成挥发性化合物对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

8.1.2.16.2 人工合成挥发性化合物对荔枝霜疫霉孢子囊萌发、芽管生长的影响

8.1.3 数据统计与分析

8.2 结果与分析

8.2.1 粪生链霉菌 BWL-H1产生的挥发性物质的抑菌谱

8.2.2 培养时间对粪生链霉菌 BWL-H1产生挥发性物质抑菌活性的影响

8.2.3 活性碳对粪生链霉菌BWL-H1挥发性物质抑菌活性的影响

8.2.4 挥发性物质对荔枝霜疫霉菌丝生长及孢子囊产量的影响

8.2.5 挥发性物质对荔枝霜疫霉孢子囊萌发、芽管形态的影响

8.2.6 挥发性物质对荔枝霜疫霉卵孢子产量的影响

8.2.7 挥发性物质对芽管穿透玻璃纸能力的影响

8.2.8 挥发性物质对荔枝霜疫霉超微结构的影响

8.2.9 挥发性物质对荔枝霜疫霉在离体叶片上侵染过程的影响

8.2.10 挥发性物质对离体叶片荔枝霜疫病的防治效果

8. 2.11 挥发性物质对离体枝条荔枝霜疫病的防治效果

8.2.12 挥发性物质对荔枝果实霜疫病的防治效果

8.2.13 挥发性物质成分分析

8.2.14 人工合成挥发性化合物对荔枝霜疫霉菌丝生长、孢子囊产量、孢子囊萌发和芽管生长的影响

8.3 小结

第九章 全文讨论与总结

9.1 全文讨论

9.1.1 荔枝霜疫霉拮抗放线菌的分离与筛选

9.1.2 放线菌TJGA-19、BWL-H1的鉴定

9.1.3 阿孙链霉菌TJGA-19发酵条件优化

9.1.4 阿孙链霉菌TJGA-19发酵滤液稳定性研究

9.1.5 阿孙链霉菌TJGA-19发酵滤液对荔枝霜疫霉的抑菌机理研究

9.1.6 阿孙链霉菌TJGA-19产生的挥发性物质对荔枝霜疫霉的抑菌机理及防病效果研究

9.1.7 粪生链霉菌BWL-H1产生的挥发性物质对荔枝霜疫霉的抑菌机理及防病效果研究

9.2 总结论

致 谢

参 考 文 献

附录A

附录B

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著录项

  • 作者

    邢梦玉;

  • 作者单位

    华南农业大学;

  • 授予单位 华南农业大学;
  • 学科 植物病理学
  • 授予学位 博士
  • 导师姓名 姜子德;
  • 年度 2017
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类
  • 关键词

    链霉菌; 荔枝; 疫病; 防病; 潜力;

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