自体骨髓间充质干细胞对同种异体骨和自体肌腱愈合的影响

摘要

目的：通过建立兔关节外腱-骨愈合模型，分别对实验标本进行组织学和生物力学的初步研究，探讨自体骨髓间充质干细胞（BMSCs）对同种异体骨和自体肌腱腱-骨愈合的影响。
　　方法：采用骨髓穿刺法获取新西兰白兔骨髓，用密度梯度离心法分离并体外培养、扩增、鉴定骨髓间充质干细胞。成年健康新西兰白兔47只，处死2只作为同种异体骨的来源，将45只新西兰白兔随机分为三组：第一组即自体肌腱和复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨的腱-骨固定组（A组）。第二组即自体肌腱和未复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨的腱-骨固定组（B组）。第三组即自体肌腱和自体骨的腱-骨固定组（C组）。模型的建立：在胫骨结节内侧建立直径约5mm的骨洞，以胫骨结节为支点取髌韧带内侧1/2翻转植入骨洞内。第一组用复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨填塞骨洞包裹肌腱，第二组用未复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨填塞骨洞包裹肌腱。第三组用自体骨填塞骨洞包裹肌腱。术后分笼喂养，分别于术后第3、6、12周三个时间点取材进行组织学检查，每次各3只兔子。于术后第6、12周两个时间点取材进行生物力学检测，每次各3只兔子。所采集的数据用SPSS17.0统计软件进行分析，采用单因素方差分析以及SNK-q检验，检验水准a=0.05，当p﹤0.05时有统计学意义。
　　结果：组织学观察：术后3周第一组腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和多量炎性细胞，可见胶原纤维形成。第二组：腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和大量的炎性细胞，胶原纤维形成少。第三组：腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和多量的炎性细胞，可见胶原纤维形成，骨母细胞增生活跃。术后6周第一组：腱骨界面间部分成纤维细胞转变为纤维细胞，可见排列较有序的胶原纤维。第二组：腱骨界面间可见纤维细胞，较少发现胶原纤维与新生骨组织结合。第三组：可见大量排列有序的胶原纤维形成并与新生骨组织结合。术后12周第一组腱骨界面间可见类似正常的纤维软骨性的腱骨连接。第二组：少量胶原纤维与骨组织融合。第三组：腱骨界面之间有sharpey纤维形成。
　　生物力学检测结果：第6周生物力学检测结果显示：最大拔出负荷第一组和第三组明显优于第二组。第一组和第三组无显著性差异。第12周生物力学检测结果显示：最大拔出负荷三组无明显差异，无统计学意义。
　　结论：（1）在腱-骨愈合的早期复合 BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学明显优于未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱的腱-骨愈合。（2）在腱-骨愈合的早期自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学明显优于未复合 BMSCs的同种异体骨与自体肌腱的腱-骨愈合。（3）在腱-骨愈合的早期复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合和自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学无明显差异。（4）在腱骨愈合的后期复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的生物力学无明显差异。（5）在腱骨愈合的后期组织学观察从优到差依次是复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、自体骨与自体肌腱腱-骨愈合、未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合。

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中文摘要

英文摘要

引言

材料和方法

1 主要材料、试剂和仪器设备

2 实验方法

3 观察指标

4 统计学分析

实验结果

1 兔BMSCs的鉴定结果

2同种异体骨复合兔BMSCs计数结果

3 大体观察

4 组织学观察

5 生物力学检测结果

讨论

5.1兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定

5.2同种异体骨移植的免疫反应

5.3肌腱移植物腱-骨止点的转归

本实验的局限性

结论

参考文献

实验图 片

致谢

附录A 英中文术语和缩略语对照表

附录B 个人简介

附录C 综述: 影响腱-骨愈合因素的研究进展