食源性副溶血弧菌耐药性及PFGE分子分型研究

摘要

随着经济的迅速发展和生活水平的不断提高，人们对健康食品也越来越关注。海产品含有人体必需的蛋白质、多种不饱和脂肪酸、多种维生素及微量元素，是人们最喜欢的健康食品之一。但是根据国家食源性疾病监测网对我国13个地区食源性疾病爆发情况的监测数据，副溶血弧菌食物中毒已在数量上超过沙门氏菌中毒案例，成为我国首要食源性致病菌。因此为了避免副溶血弧菌食物中毒有必要对副溶血弧菌进行深入研究。
　　 本文以从河北省6个市的海产品中分离的38株副溶血弧菌作为研究对象，主要针对其耐药情况、耐药基因组岛及菌株之间的相互关系进行研究，并建立了快速脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对它进行分子分型，以期为保证食品安全、防止食源性感染的发生及对食源性感染的流行病调查和溯源提供实验依据，同时也为建立完善的食源性感染的网络检测及控制食源性感染的发生奠定基础。主要研究内容及结果如下：
　　 1、通过药敏试验探讨副溶血弧菌对13种抗生素的耐药情况。结果表明：38株副溶血弧菌对氨苄西林的高度耐药率达到了100％，对氯霉素和喹诺酮类抗生素都很敏感。从保定、廊坊、石家庄这三个地区分离的副溶血弧菌的耐药谱比较相似。
　　 2、利用PCR技术检测了mecA耐药基因，试图通过mecA耐药基因寻找副溶血弧菌的耐药基因组岛。结果表明：从河北省分离的38株副溶血弧菌中共检测出7株携带有mecA基因的部分序列。
　　 3、采用PFGE技术对副溶血弧菌进行分子分型，在基因组水平上探讨菌株之间的相互关系。结果表明：菌株的同源性在71％～100％之间；大体上来说是分离自同一个地区的菌株同源性相对于不同地区的要高（邯郸市分离的菌株除外）。分离自石家庄、廊坊、保定这三个市的弧菌同源性达到了85％，基因型都属于E，耐药谱比较相似，并且这三个市在地理位置上也处于相邻位置，这表明细菌的PFGE同源性分析结果、地理位置及耐药谱之间存在有一定的相关性。同时，优化了PFGE技术，缩短了前处理时间，这对控制食物中毒及分子流行病学研究有极其重要的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

第一章 绪论

1.1 细菌耐药性的研究概况

1.1.1 细菌耐药性的产生

1.1.2 细菌耐药机制

1.1.3 细菌耐药性的传播机理

1.1.4 细菌耐药性监测

1.2 细菌耐药基因组岛的研究概况

1.2.1 细菌耐药基因组岛的特点

1.2.2 耐药基因组岛的研究进展

1.2.3 耐药基因组岛研究的意义

1.3 病原性海洋弧菌的研究现状

1.3.1 副溶血弧菌及其致毒因子

1.3.2 副溶血弧菌引起的食物中毒概况

1.4 脉冲场凝胶电泳技术在分子分型中的应用研究

1.4.1 脉冲场凝胶电泳概述

1.4.3 脉冲场凝胶电泳技术的实际应用

1.4.2 PulseNet

1.5 本论文的研究意义及研究内容

1.5.1 研究背景及意义

1.5.2 主要研究内容

第二章 海产品中副溶血弧菌耐药性调查研究

2.1 前言

2.2 实验材料和设备

2.2.1 主要仪器设备

2.2.2 主要试剂和实验耗材

2.2.3 样本

2.2.4 主要培养基的配制

2.3 实验方法

2.3.1 海产品中副溶血弧菌的分离、鉴定及保存

2.3.2 副溶血弧菌对13种抗生素的体外敏感性测定

2.4 结果与讨论

2.4.1 副溶血弧菌分离及鉴定结果

2.4.2 38株副溶血弧菌的药敏试验结果

2.5 本章小结

附表

第三章 海产品中副溶血弧菌耐药基因组岛的研究

3.1 前言

3.2 实验材料与设备

3.2.1 主要仪器和设备

3.2.2 主要试剂和实验耗材

3.2.3 实验菌株

3.2.4 主要培养基和常用溶液的配制

3.3 实验过程与方法

3.3.1 副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌基因组DNA提取

3.3.2. PCR扩增mecA耐药基因

3.3.3 琼脂糖凝胶电泳

3.3.4 凝胶电泳产物的纯化和测序

3.3.5 序列分析

3.4 结果与讨论

3.4.1 mecA序列的扩增和分析

3.4.2 PCR扩增产物的纯化结果

3.4.2 测序结果及分析

3.5 本章小结

第四章 海产品中副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分型

4.1 前言

4.2 实验材料与设备

4.2.1 主要仪器和设备

4.2.2 主要试剂和实验耗材

4.2.3 实验菌株

4.2.4 主要培养基和常用溶液的配制

4.3 实验过程与方法

4.3.1 细菌前处理

4.3.2 琼脂糖包埋细菌

4.3.3 细胞的裂解

4.3.3 细胞的消化

4.3.4 琼脂糖凝胶的制备

4.3.4 脉冲电泳条件的设置

4.4 结果与讨论

4.4.1 脉冲场凝胶电泳结果

4.4.1 同源性分析结果

4.4 本章小结

结论与展望

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢