中药复方清肝排毒饮抗乙肝病毒和实验性肝损伤的药效学研究

摘要

研究目的:通过体内外抗乙肝病毒实验研究，评价中药复方清肝排毒饮抗乙肝病毒的作用效果；通过抗免疫性肝损伤和化学性肝损伤的实验研究，评价该复方对实验性肝损伤的保护作用效果并探讨其作用机制，为清肝排毒饮应用于临床治疗慢性乙型肝炎进一步提供实验依据。 实验内容: 1、复方清肝排毒饮对小鼠的急性毒性试验在小鼠急性毒性试验研究，我们通过记录动物中毒表现及死亡情况，测定不同浓度的清肝排毒饮对小鼠的毒副作用，从而确定试验的剂量范围。结果显示，复方清肝排毒饮80g/kg/d剂量可能对小鼠影响较大，而40g/kg/d剂量下对小鼠可能影响较小，故本课题以下实验所用剂量均在40g/kg/d剂量范围以下进行。 2、复方清肝排毒饮体内外抗乙肝病毒实验研究 在体内抗DHBV的实验研究中，选择由先天感染性鸭乙肝病毒为模型。分别于T<,0>、T<,5>、T<,10>、P<,3>各时间点采血，分离血清，用斑点杂交法测定血清中DHBV的载量变化。结果显示，清肝排毒饮大、中剂量组均有不同程度抑制DHBV DNA作用，与拉米夫定组相比较无显著差异性，停药后反跳不明显。 在体外抗HBV的实验研究中，采用2.2.15细胞模型，以HBsAg、HBeAg作为药物效果检测指标，并用MTT法检测药物细胞毒性。结果显示，清肝排毒饮对2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC<,50>为>40.23mg/mL。复方清肝排毒饮对HBsAg，HBeAg的半数抑制浓度(IC<,50>)分别为<27.75mg/mL和54.42mg/mL；治疗指数(TI)分别为>1.45和>0.74，显示清肝排毒饮在体外无显著的直接抑制乙肝病毒复制的作用。 3、复方清肝排毒饮体内抗免疫性肝损伤和化学性肝损伤的实验研究 体内抗免疫性肝损伤作用研究采用刀豆蛋白A(Con A)所诱导的小鼠急性肝损伤模型，用清肝排毒饮大、小剂量组(40g/kg，20g/kg)进行治疗，并与联苯双酯治疗组为对照，检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)含量，观察肝组织病理改变。清肝排毒饮大剂量组小鼠ALT活性、IFN-γ和TNF-α含量均明显低于模型组，差异有显著性意义(P<0.05)，但与联苯双酯组比较，差异无显著性意义(P>0.05)；清肝排毒饮大剂量组肝脏病理改变明显减轻。表明清肝排毒饮对Con A所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用，抑制T淋巴细胞活化和IFN-γ、TNF-α的释放是其主要的作用机制。 体内抗化学肝损伤作用研究采用醋氨酚所导致的小鼠肝损伤模型，用清肝排毒饮大、中、小剂量组(80g/Kg， 40g/kg，20g/kg)进行治疗，并与联苯双酯治疗组对照，检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平，观察肝组织病理改变。清肝排毒饮大、中剂量组能显著抑制小鼠血清ALT，升高SOD、GSH水平，与模型组比较，差异有显著性意义(P<0.05)，但与联苯双酯组比较，差异无显著性意义(P>0.05)；清肝排毒饮大、中剂量组肝脏病理改变明显减轻。表明清肝排毒饮对醋氨酚所致小鼠化学性肝损伤具有较好的保护作用，作用机制与抗氧自由基损伤有关。 结论:清肝排毒饮有较好的抗鸭乙肝病毒和抗实验性肝损伤作用，有着较好的应用开发前景。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：外文缩略语表

声明

引言

第一部分 文献研究

第一节 中医药防治乙型肝炎研究进展

一、乙型病毒性肝炎作用机理研究进展

二、乙型肝炎病毒模型研究概况

三、西医治疗乙型肝炎的研究进展

四、中医治疗乙型肝炎的研究现状

第二节 中医药防治肝损伤研究进展

一、肝损伤的作用机理研究进展

二、肝损伤动物模型研究进展

三、西医治疗肝损伤的研究进展

四、中医治疗肝损伤的研究进展

第三节 复方清肝排毒饮的研究前景

一、复方清肝排毒饮临床研究成果

二、复方清肝排毒饮研究思路

第二部分、实验研究

第一节 清肝排毒饮急性毒性实验（改进寇氏法）

第二节 清肝排毒饮抗乙肝病毒实验研究

一、清肝排毒饮抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

二、清肝排毒饮体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

第三节 清肝排毒饮抗肝损伤实验

一、清肝排毒饮对刀豆蛋白A所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

二、清肝排毒饮对醋氨酚所致小鼠化学性肝损伤的保护作用

全文结论

展望

参考文献

附图

致谢